Yhdestä vaalean pastöroimattoman oluen näytteestä löytyi BGKP;
- 1 kalanäytteessä x \ k - ylimäärä QMAFAnM:ää;
- 3 ilmanäytteessä jäähdytyskammiosta - havaittiin ylimäärä CFU:ta hometta - terveysluokitus on "huono";
- 4 kuivatun kalanäytteestä havaittiin ylimäärä CFU:ta hometta;
- 4 kuivatun kalanäytteestä havaittiin ylimäärä QMAFAnM:ää;
- 5 näytteessä juomavesi(Arteesinen vesi, joka on pullotettu automaattisten laitteiden verkoston kautta veden pullottamiseksi kuluttajasäiliöihin) - TMP ylittää.

Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisesti anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittäminen (QMAFAnM tai mikrobien kokonaislukumäärä, TMC) viittaa terveysindikatiivisten mikro-organismien lukumäärän arviointiin. KMAFAnM sisältää erilaisia ​​taksonomisia mikro-organismien ryhmiä - bakteereja, hiivoja, homeita. Niiden kokonaismäärä kertoo tuotteen saniteetti- ja hygieniatilasta, sen mikroflooran saastumisesta. Optimaalinen lämpötila KMAFAnM 35-37оС:n kasvuun (aerobisissa olosuhteissa); niiden kasvun lämpötilaraja on 20-45°С. Mesofiiliset mikro-organismit elävät lämminveristen eläinten kehossa ja selviävät myös maaperässä, vedessä, ilmassa. QMAFAnM-indikaattori kuvaa mikro-organismien kokonaispitoisuutta tuotteessa. Sen ohjaus kaikissa teknologisissa vaiheissa mahdollistaa sen, että voidaan jäljittää, kuinka "puhtaat" raaka-aineet toimitetaan tuotantoon, miten niiden "puhtausaste" muuttuu lämpökäsittelyn jälkeen ja saastuuko tuote uudelleen lämpökäsittelyn, pakkaamisen ja varastoinnin jälkeen. QMAFAnM-indeksiä arvioidaan mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisesti anaerobisten mikro-organismien lukumäärällä, jotka ovat kasvaneet näkyvinä pesäkkeinä kiinteällä ravintoalustalla 24-48 tunnin inkuboinnin jälkeen 37 ºС:ssa.

QMAFanM on yleisin mikrobiturvallisuustesti. Tämä indikaattori käytetään kaikkialla tuotteiden laadun arvioinnissa, lukuun ottamatta niitä, joiden valmistuksessa käytetään erityisiä mikrobiviljelmiä (esim. olut, kvass, maitotuotteet jne.). QMAFAnM-indikaattorin arvo riippuu monista tekijöistä. Tärkeimmät ovat tuotteen lämpökäsittelytapa, lämpötilajärjestelmä kuljetus-, varastointi- ja myyntiaikana tuotteen kosteuspitoisuus ja ilman suhteellinen kosteus, hapen läsnäolo, tuotteen happamuus jne. QMAFAnM:n kasvu viittaa mikro-organismien lisääntymiseen, joihin voi kuulua patogeenejä ja mikro-organismeja, jotka aiheuttavat tuotteen pilaantumista (esimerkiksi hometta).

Vaikka bakteerien kokonaismäärä QMAFAnM ei voi suoraan osoittaa patogeenisten bakteerien läsnäoloa tai puuttumista elintarvikkeita, tätä indikaattoria käytetään laajalti esimerkiksi meijeriteollisuudessa. KMAFAnM (OMP) -indikaattori kuvaa meijerituotteiden saniteetti- ja hygieeniset tuotanto- ja varastointiolosuhteet. Tuotteet sisältävät suuri määrä bakteereja, jopa ei-patogeenisiä eivätkä muuta niitä aistinvaraiset ominaisuudet, ei voida pitää täydellisenä. Elinkykyisten bakteerisolujen merkittävä pitoisuus elintarvikkeissa (lukuun ottamatta niitä, joiden valmistuksessa käytetään hapateaineita) viittaa joko riittämättömään tehokkuuteen. lämpökäsittely raaka-aineet, laitteiden huono puhdistus tai tuotteen epätyydyttävät säilytysolosuhteet. Tuotteen lisääntynyt bakteerikontaminaatio osoittaa myös sen mahdollisen pilaantumisen.

Kuluttajalle KMAFAnM (OMP) -indikaattori kuvaa elintarvikkeiden laatua, tuoreutta ja turvallisuutta. Samaan aikaan tuotteen laadun arvioinnissa pelkästään tämän indikaattorin perusteella on useita haittoja. Ensinnäkin tämä on vain yleinen, kvantitatiivinen arvio mikro-organismeista, koska tutkimuksessa ei oteta huomioon patogeenisiä, ehdollisesti patogeenisiä, psykofiilisiä ja termofiilisiä mikro-organismeja. Toiseksi menetelmää ei voida hyväksyä tuotteille, jotka sisältävät teknologista ja erityistä mikroflooraa.

KMAFAnM-indikaattori mahdollistaa myös tuotannon saniteetti- ja hygieniaolosuhteiden tason arvioinnin sosiaalisella alueella, sen avulla voidaan havaita tuotteen varastointi- ja kuljetusjärjestelyjen rikkomukset.

Tekijä: indikaattori QMAFAnM

Mutta tämän indikaattorin laadun arvioinnissa on useita haittoja:

Anaerobiset mikro-organismit eivät sisälly tähän;

Psykofiilisiä ja termofiilisiä mikro-organismeja ei oteta huomioon;

Vain kvantifioi mikrobiston;

Ei sisällä patogeenisiä mikro-organismeja;

Ei sovellu tuotteille, jotka sisältävät teknologista mikrobiotaa.

2. Terveydenhoitoa osoittavat mikro-organismit:

Enterobacteriaceae-heimon bakteerit;

Enterokokit.

Terveysindikatiivisten mikro-organismien havaitseminen missä tahansa esineessä osoittaa sen saastumisen ihmisen tai eläimen eritteillä ja mahdollisen patogeenisten mikro-organismien esiintymisen, jotka liittyvät epidemiologisesti vastaaviin eritteisiin.

Escherichia coli -ryhmän (BGKP) bakteerien havaitseminen. Niiden läsnäolo osoittaa esineen ulosteen saastumisen. Tämän indikaattorin määrälliset arvot kuvaavat tämän saastumisen astetta. BGKP voi päästä elintarvikkeisiin veden, pölyn, likaisten käsien kautta ja hyönteisten kantamana.

Enterobacteriaceae-suvun bakteerit sisältyvät standardien mukaan indikatiivisten terveydellisten mikro-organismien määrään. Tämä perhe sisältää monenlaisia ​​ei-patogeenisiä, opportunistisia ja patogeenisiä mikro-organismeja, joten yli 10 2 CFU:n havaitseminen enterobakteereja, jotka eivät ole patogeenisiä lajeja, 1 g:ssa (cm 3) tuotetta osoittavat sen mahdollisen epidemiologisen vaaran.

Enterokokkien ja erityisesti E. faecalisin esiintyminen ympäristössä ja elintarvikkeissa osoittaa tuoreen ulosteen saastumisen. Yleensä ne löytyvät valmistuneet tuotteet puhuu teknisten tuotantotapojen rikkomisesta.

3. Ehdolliset patogeeniset mikro-organismit:

Escherichia coli;

Staphylococcus aureus;

Proteus-suvun bakteerit;

Bacillus cereus;

Sulfiittia vähentävät klostridit;

Vibrio parahaemolyticus.

E. colilla (Escherichia coli) on kaksoismerkitys terveydellisesti indikatiivisena ja ehdollisesti patogeenisena mikro-organismina.

Koagulaasipositiivinen Staphylococcus aureus (Staphylococcus aureus) määritellään mahdollisesti haitalliseksi mikro-organismiksi elintarvikkeissa, jotka ovat läpäisseet lämpökäsittely... Sen lisääntynyt määrä ruoassa on merkki jälkimmäisen toissijaisesta saastumisesta. Mikro-organismi pääsee tuotteisiin saastuneista laitteista, varastosta, ihosta, henkilöstön nenänielusta sekä sairaista eläimistä. Stafylokokeille on ominaista vastustuskyky haitallisia tekijöitä vastaan ympäristöön, ne lisääntyvät intensiivisesti lämpötilassa 18 ÷ 20 ºС, hitaasti - 5 ÷ 6 ºС. Ne pystyvät lisääntymään tiivistetyissä sokeriliuoksissa (jopa 60 %) ja pöytäsuola(jopa 12 ÷ 14 %). Ne säilyvät elinkelpoisina 6 kuukautta kuivatussa tilassa. Staphylococcus aureuksen lisääntyminen ruoassa 10 6 - 10 9 CFU / g (cm 3) alkuperäisestä kylvöstä riippumatta johtaa enterotoksiinin kertymiseen.

Proteus-suvun bakteereista kaksi lajia P. vulgaris ja P. mirabilis ovat myrkyllisten infektioiden aiheuttajia.

Vahamainen basilli (Bacillus cereus) on luonnossa erittäin laajalle levinnyt, sen pääasiallinen elinympäristö on maaperä. Sitä löytyy myös avoimien säiliöiden vedestä (jopa 10 3 ÷ 10 4 CFU / cm 3), vesijohtovettä ja ilmassa. Nämä esineet toimivat yritysten laitteiden ja laitteiden saastumisen lähteenä. Ruokateollisuus ja Ateriapalvelu ja kylvää erilaisia ​​ruokia. Jos B. сereus -bakteeria havaitaan yli 10 3 CFU / g (cm 3) ja patogeenistä mikrobiotaa ei ole, voidaan tätä mikro-organismia pitää ruokamyrkytyksen aiheuttajana.

Sulfiittia vähentävät klostridit ovat itiöitä muodostavia anaerobisia bakteereja, pääasiassa C. perfringens ja C. sporogenes. C. perfringens esiintyy jatkuvasti ihmisten ja eläinten suolistossa ja viittaa ulosteen saastumiseen. Sulfiittia vähentävien klostridien esiintyminen tuotteissa yli 10 2 CFU / g (cm 3) osoittaa työssä olevien saniteetti- ja hygieniajärjestelyjen rikkomista, erityisesti laitteiden huonoa valmistelua, maaperän, likaisen veden tunkeutumista. jne., ja lisäksi mahdollinen uhka C. botulinumin läsnäolo.

Tilojen maaperästä ja pölystä C. perfringensiä löytyy lähes 100 % tutkituista näytteistä, ravintoloiden ilmasta 10-12 % tapauksista, ravintolayksikön laitteista - lähes 30 %. tapauksissa ja elintarvikeyksikön työntekijöiden terveysvaatteissa - 11-19% tapauksista. ... Elintarvikkeissa C. perfringens esiintyy erityisen usein lihassa ja lihatuotteet eniten sekaantunut elintarvikevälitteisiin epidemioihin. Eläinten kudosten ja elinten intravitaalisen kontaminaation lisäksi kontaminaatiota voi tapahtua ruhojen teurastuksen, lihan paloittelun, leivän ja mausteiden lisäämisen aikana, usein korkealla kontaminaatioasteella. Käynnissä kulinaarinen käsittely C. perfringensin itiöt säilyvät hengissä ja voivat itää ja lisääntyä jopa valtavia lukuja pystyy aiheuttamaan ruoka myrkytys... C. perfringensin itiöt voivat sisältää ja kasviperäisiä tuotteita... Elintarvikkeiden C. perfringensin itiöillä olevan saastumisen kriittisen tason katsotaan olevan ≥10 5 CFU / g (cm 3).

Parahemolyyttiset tai halofiiliset vibriot (Vibrio parahaemolyticus) ovat yleisiä ulkoympäristössä, pääasiassa rannikkomerivesissä, merikala ja mereneläviä pohjasedimentissä. Yksi Vibrio-suvun edustajista, johon kuuluu noin 45 lajia, V. Parahaemolyticus on aiheuttanut lukuisia gastroenteriittien puhkeamisen, joka liittyy saastuneiden merenelävien - pakastettujen, suolattujen, savustettu kala, äyriäisiä. Tämän mikro-organismin kierto määritettiin kaavion mukaisesti merivettä- kala - ihminen - jätevesi- merivesi.

4. Patogeeniset mikro-organismit:

salmonella;

Listeria monocytogenes;

Yersinia-suvun bakteerit.

Salmonella-suvun bakteerit tunnustetaan tällä hetkellä koko patogeenisten suolistobakteerien ryhmän indikaattoriksi. Tämä johtuu ensinnäkin läsnäolosta tehokkaita menetelmiä niiden havaitseminen ja toiseksi se, että salmonellan havaitseminen vastaa jossain määrin Shigellan havaitsemista samasta kohteesta, joka on menetelmällisesti paljon vaikeampi eristää kuin Salmonella.

Tällä hetkellä säädösasiakirjoissa standardoidaan tuotteen määrä grammoina (cm 3), jossa Salmonella-suvun bakteerien esiintyminen ei ole hyväksyttävää.

Yersinia-suvun bakteerit ja erityisesti Y. enterocolitica ovat erilaisten tartuntatautien aiheuttajia. kliiniset ilmentymät... Yersinioosiksi diagnosoidaan usein väärin enterokoliitiksi, ruokaperäisiksi toksikoinfektioiksi, tulirokkoksi, vihurirokoksi, hepatiittiksi, umpilisäkkeeksi, reumaksiksi, akuutiksi hengityssairaus jne.

Kyky lisääntyä lämpötilassa 0 ÷ 5 °C kylmät huoneet, vihanneskaupat jne., johtaa niiden määrän kasvuun saastuneissa tuotteissa. Yersinia ei vaadi ympäristöolosuhteita ja lisääntyy aktiivisesti maaperässä ja vedessä. Näiden mikro-organismien tärkeimmät kantajat ovat luonnonvaraiset jyrsijät ja linnut. Ihmisen pääasiallinen tartuntatapa on ruoansulatuskanava. Tartunta tarttuu saastuneen ruoan kautta, useammin maaperän ja vesistöjen, harvemmin eläinten eritteiden mukana. Useimmiten yksittäiset sairaudet ja ryhmäepidemiat syntyvät tartunnan saaneiden maitotuotteiden ja vihannesten - kaalin, porkkanoiden, sipulien jne.

Listeria monocytogenes on zoonoosiluonteisen vaarallisen tartuntataudin aiheuttaja, joka tarttuu pääasiassa elintarviketeitse. Patogeeniset listeriat ovat laajalle levinneitä luonnossa ja voivat saastuttaa erilaisia ​​tuotteita - maitotuotteita, lihaa, kalaa, munia, äyriäisiä, kasviraaka-aineita jne. Sääntelyasiakirjoissa määritellään tuotteen massa tai tilavuus, josta näitä bakteereja ei pitäisi olla.

5. Pilaantumismikro-organismeja ovat:

Homesienet;

Maitohappobakteerit.

Normatiiviset asiakirjat asettavat määrälliset kriteerit niiden sisällölle joissakin elintarvikeryhmissä. Tämän mikro-organismiryhmän luettelo on kuitenkin epätäydellinen. Siten esitetään Pseudomonas-suvun mätänevien bakteerien merkitys pilaantumisen aiheuttajina. Elintarvikkeiden mikrobiologista stabiilisuutta varastoinnin aikana on myös arvioitava sellaisilla indikaattoreilla kuin KMAFanM, termofiiliset ja psykofiiliset mikro-organismit sekä mikro-organismien erityistyypit (tai suvut) - tyypilliset pilaantumisen patogeenit. Esimerkiksi tuotteissa, jotka on tarkoitettu varastoitaviksi yli 30 °C ± 5 °C lämpötiloissa, määritetään termofiilien määrä; varastointiin säätelemättömässä lämpötilassa 20 ° C ± 5 ° C - KMAFAnM; varastointiin matalissa lämpötiloissa - psykofiilien lukumäärä.

6. Aloitusmikrobiston ja probioottisten mikro-organismien mikro-organismit:

Maitohappo- ja propionihappobakteerit;

bifidobakteerit;

Normatiivisten indikaattoreiden lukumäärä sisältää käynnistinmikrobiston mikro-organismit ja probioottiset mikro-organismit (tuotteille, joilla on standardoitu bioteknogeenisen mikrobiston taso). Nämä indikaattorit sisältävät maitohapon, propionihappobakteerien, hiivan, bifidobakteerien ja muiden kvantitatiivisen sisällön indikaattorit. Näiden indikaattoreiden arvot määräytyvät tietyn tuotteen tuotannon erityispiirteiden ja sen tarkoituksen mukaan.

Kontrollikysymykset:

1. Mikä asiakirja sääteleeä ja -menetelmiä niiden määrittämiseksi?

2. Mikä on HACCP-laadunvalvontajärjestelmän pääperiaate?

3. Luettele HACCP-valvontajärjestelmän tärkeimmät määräykset.

4. Kansainvälisen ISO-standardien mukaisen tuotannon laadun arviointijärjestelmän pääperiaate?

5. Mitkä vaarat sisältyvät niihin liittyvien vaarojen luetteloon pakollinen? Missä ne on listattu?

Mikrobiologia Keksintö koskee mikrobiologiaa, erityisesti elintarvikkeiden kontaminaatioiden määritystä. Menetelmään kuuluu liha-peptoniagarin valmistus, sen kaataminen petrimaljoihin, näytteiden otto elintarvikkeista, suspension valmistus elintarvikenäytteestä, testisuspension desimaalilaimennosten valmistus ja testisuspension desimaalilaimennosten sijoittaminen petrimaljoihin, viljelemällä ja laskemalla pesäkkeiden lukumäärä kaavan mukaan: x = an × 10, n on laimennusnopeus. Lisäksi testisuspension desimaalilaimennosten valmistukseen käytetään 0,6-0,8-prosenttista liha-peptoni-agar-liuosta, kun taas testisuspension desimaalilaimennokset asetetaan kalvosuodattimille, jotka sijaitsevat liha-peptoni-agarin pinnalla. petrimaljassa. Menetelmä on ratkaisultaan omaperäinen, yksinkertainen toteuttaa, informatiivinen, antaa tilastollisesti luotettavia tuloksia; voit vähentää merkittävästi ravintoalustojen, steriilien bakteriologisten lasiesineiden kulutusta ja analyysiaikaa; antaa sinun antaa todellisen kvantitatiivisen arvion mikro-organismien sisällöstä, jotka muodostavat konfluenttia kasvua ja muodostavat erittäin pieniä pesäkkeitä, ja voit myös tutkia populaatioprosesseja valomikroskopian avulla. 1 dwg, 1 tbl

Keksintö liittyy eläinlääketieteellisen ja hygieenisen tarkastuksen, sanitaation ja mikrobiologian alaan, nimittäin elintarvikkeiden saastumisen ja ympäristön esineiden saniteetti- ja hygieenisen tilan määrittämiseen.

Lähin on menetelmä mikro-organismien määrän määrittämiseksi makkarat ja lihatuotteet vedessä. Tunnettu menetelmä mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien määrän määrittäminen 1 g:ssa tuotetta on seuraava: liuoksen valmistus laimennusta varten ja liha-peptoniagar siirrostusta varten; analyysi; tulosten kirjanpito. 1. Haitta olemassa olevalla tavalla on, että näytteiden laimentamiseen käytetty natriumkloridiliuos (0,85 %) ei ole puskuroitu ja isotoninen vain nisäkässolujen suhteen, ja analyyseihin kuluu myös suuri määrä viljelyalustaa, bakteriologisia maljoja ja työaikaa. Lisäksi tällä menetelmällä ei voida antaa todellista kvantitatiivista arviota mikro-organismien pitoisuudesta, jotka muodostavat konfluenttia kasvua ja muodostavat hyvin pieniä (kasteisia) pesäkkeitä (Yleisen bakteriologian menetelmät. Toimittanut F. Gerhard et al. M .: "Mir ", 1983, s. 442-512).

Keksinnön tavoitteena on vähentää käytetyn ravintoalustan, bakteriologisten lasiesineiden määrää ja työskentelyajan kustannuksia käyttämällä puolinestemäisen MPA:n fysiologista liuosta 0,85 % natriumkloridiliuoksen sijaan, minkä jälkeen kylvetään pisara laimennettua testiä. suspensio kalvosuodattimen pinnalle.

Sovellus tätä menetelmää perustuu siihen, että laimentamiseen käytetään fysiologista puolinestemäisen liha-peptoniagarin (0,6-0,8 %) liuosta, joka koostuu 1 dm 3 tislattua vettä, 10 g peptonia, 5 g natriumkloridia 0,3 g vedetöntä KH2PO4:a, 0,6 g vedetöntä NaH2PO4:a ja 0,6-0,8 g agar-agaria; Väliaineen pH on 7,0-7,2, josta pisaroita levitetään kalvosuodattimien pinnalle.

Käyttö laimennusliuoksena (0,6-0,8 % liha-peptoni puolinestemäinen agar) ja sen jälkeen pisara laimennettua testisuspensiota kylvö kalvosuodattimelle on alkuperäinen ratkaisu, yksinkertainen toteuttaa, informatiivinen ja antaa tilastollisesti luotettavia tuloksia; avulla voit vähentää merkittävästi ravintoalustan, steriilien bakteriologisten lasiesineiden kulutusta ja analyysiaikaa; antaa sinun antaa todellisen kvantitatiivisen arvion mikro-organismien sisällöstä, jotka muodostavat konfluenttia kasvua ja muodostavat erittäin pieniä (kasteisia) pesäkkeitä, ja voit myös tutkia populaatioprosesseja valomikroskopian avulla.

Analysointia varten otetaan näytteitä elintarvikkeista voimassa olevien säännösten mukaisesti (GOST 18963-73. Juomavesi. Terveys- ja bakteriologiset analyysimenetelmät. M., 1986; GOST 9958-81. Makkaratuotteet ja lihatuotteet. M. , 1982; GOST 7702.2 .1-95. Siipikarjanliha, siipikarjan sivutuotteet ja puolivalmisteet. M., 1994).

Suspension valmistamiseksi näyte elintarviketuotteista laitetaan homogenisaattorin steriiliin pulloon (lasiin) ja lisätään 0,85-prosenttista natriumkloridiliuosta nelinkertainen määrä. Homogenointi suoritetaan sähkösekoittimessa. Ensin materiaali murskataan paloiksi veitsien hitaalla pyörimisnopeudella, sitten 15 000-20 000 rpm 2,5 minuutin ajan. Homogenisaattorin puuttuessa testisuspensio on sallittua valmistaa steriilissä posliinihuhmareessa jauhamalla 20 g tuotetta 2-3 g:lla steriiliä hiekkaa lisäämällä vähitellen 80 cm steriiliä suolaliuosta. Inokulaatiota varten ravintoalustaan ​​suspensio otetaan steriilillä mittapipetillä 15 minuutin altistuksen jälkeen klo. huonelämpötila... 1 ml suspensiota sisältää 0,2 g tuotetta.

Lihapeptoniagar kaadetaan lasi- tai muovipetrimaljoihin (halkaisijaltaan 9 cm) ja agar jäähtymisen jälkeen asetetaan sen pinnalle 5-6 kalvosuodatinta steriileillä pinseteillä. Kaavio esittää mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittämisen päävaiheet ehdotetulla menetelmällä.

Puolinestemäisen MPA:n 0,6-0,8 % suolaliuos kaadetaan steriileihin koeputkiin 9 cm 3:n tilavuudella. Sitten 9 cm3:n puolinestemäisen MPA:n fysiologiseen liuokseen valmistetaan desimaalilaimennokset tutkitusta suspensiosta. Tätä varten 1 cm 3 testisuspensiota syötetään ensimmäiseen koeputkeen 9 cm 3 puolinestemäisen agarin kanssa ensimmäisestä putkesta sen jälkeen, kun 1 cm 3 testisuspensiota on sekoitettu perusteellisesti, siirretään toiseen jne. . 0,1 ml (1 tippa) laimennettua viljelmää levitetään kalvosuodattimelle, joka sijaitsee MPA:n päällä maljassa. Yhteen astiaan voidaan laittaa 5-6 tippaa agaria eri viljelylaimennoksilla. Laimennetun viljelmän agarpisarat kiinteytyvät 10-15 minuutin kuluttua. Sen jälkeen petrimaljoja inkuboidaan ylösalaisin termostaatissa 37 °C:ssa 48 tuntia. Elävien bakteerisolujen määrän määrittämiseksi pesäkkeet lasketaan agarpisaroina.

Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittämiseksi kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä kerrotaan viljelmän laimennusasteella seuraavan kaavan mukaisesti:

missä x on mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä,

a - kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä,

n on laimennusaste.

Konfluenttia kasvua tuottavien ja hyvin pieniä (kasteisia) pesäkkeitä muodostavien mikro-organismien pitoisuuden määrittämiseksi sekä populaatioprosessien tutkimiseksi valomikroskopialla kalvosuodattimilla kasvatetut pesäkkeet kiinnitetään 25-prosenttisessa glutaraldehydissä 30-40 minuutin ajan. Sitten kalvosuodatin asetetaan lasilevyn pinnalle ja siihen lisätään muutama tippa propyleenioksidia. Kalvosuodatin muuttuu läpinäkyväksi ja jopa erittäin pienet (kasteiset) pesäkkeet voidaan lukea mikroskoopin tai suurennuslasin läpi ja ottaa tarvittaessa mikrovalokuvaa.

Menetelmä selitetään seuraavassa konkreettisia esimerkkejä täytäntöönpano (katso taulukko).

Selite: Menetelmä 1 - lähin analogi

menetelmä 2 - ehdotettu

Esimerkki 1. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määritys keitetyssä makkarassa. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määritys suoritettiin kahdella tavalla: Menetelmä 1 (prototyyppi) - Analyysiä varten liha-peptoniagar kaadetaan lasi- tai muovisiin petrimaljoihin (halkaisijaltaan 9 cm). Näytteenotto elintarvikkeista suoritettiin voimassa olevien säädösasiakirjojen (GOST 9958-81. Makkaratuotteet ja lihatuotteet. M., 1982) mukaisesti. Suspension valmistamiseksi punnittu annos elintarviketuotteita laitettiin homogenisaattorin steriiliin pulloon (lasiin) ja lisättiin nelinkertainen 0,85 % natriumkloridiliuos. Homogenointi suoritettiin sähkösekoittimessa. Ensin materiaali murskattiin paloiksi veitsien hitaalla pyörimisnopeudella, sitten 15 000-20 000 rpm 2,5 minuutin ajan. Ravintoalustaan ​​ymppäämistä varten suspensio otettiin steriilillä asteikolla varustetulla pipetillä 15 minuutin huoneenlämpötilassa altistuksen jälkeen. 1 ml suspensiota sisältää 0,2 g tuotetta. Valmistettiin 3 laimennosta tutkitusta suspensiosta fysiologiseen natriumkloridiliuokseen: natriumkloridin suolaliuosta kaadetaan 9 cm3 steriileihin koeputkiin. Sitten 9 cm3:n fysiologiseen natriumkloridiliuokseen valmistetaan testisuspension desimaalilaimennokset. Tätä varten 1 cm 3 tutkittavaa suspensiota syötetään ensimmäiseen koeputkeen, jossa on 9 cm 3 natriumkloridia, ensimmäisestä putkesta, kun on sekoitettu perusteellisesti 1 cm 3 tutkittua suspensiota, se siirretään toiseen jne. . ja sitten kustakin laimennuksesta 0,1 ml lisättiin petrimaljalle (yhteensä 3 maljaa). Sen jälkeen petrimaljoja viljeltiin ylösalaisin termostaatissa 37 °C:ssa 48 tuntia. Elävien bakteerisolujen määrän määrittämiseksi pesäkkeet laskettiin agarpisaroina. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittämiseksi kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä kerrottiin viljelmän laimennusasteella seuraavan kaavan mukaisesti:

missä x on mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä,

a - kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä,

n - laimennusaste,

Menetelmä 2 (ehdotettu) sisältää laimennusliuoksen (0,6-0,8 % suolaliuosta puolinestemäistä MPA:ta, 0,6-0,8 % suolaliuosta puolinestemäistä MPA:ta) ja liha-peptoniagarin valmistuksen siirrostusta varten; analyysi; tulosten kirjanpito.

Analyysiä varten liha-peptoniagar kaadetaan lasi- tai muovisiin petrimaljoihin (halkaisijaltaan 9 cm), agar jäähtymisen jälkeen sen pinnalle asetetaan steriileillä pinseteillä jopa 6 kalvosuodatinta. Näytteenotto elintarvikkeista suoritettiin voimassa olevien säädösasiakirjojen (GOST 9958-81. Makkaratuotteet ja lihatuotteet. M., 1982) mukaisesti. Suspension valmistamiseksi punnittu annos elintarviketuotteita laitettiin homogenisaattorin steriiliin pulloon (lasiin) ja lisättiin nelinkertainen 0,85 % natriumkloridiliuos. Homogenointi suoritettiin sähkösekoittimessa. Ensin materiaali murskattiin paloiksi veitsien hitaalla pyörimisnopeudella, sitten 15 000-20 000 rpm 2,5 minuutin ajan. Ravintoalustaan ​​ymppäämistä varten suspensio otettiin steriilillä asteikolla varustetulla pipetillä 15 minuutin huoneenlämpötilassa altistuksen jälkeen. 1 ml suspensiota sisältää 0,2 g tuotetta. Tutkitusta suspensiosta valmistettiin 3 laimennosta fysiologiseen MPA-liuokseen: 0,6-0,8 % puolinestemäisen MPA:n suolaliuosta kaadetaan 9 cm3 steriileihin koeputkiin. Sitten tutkitun suspension desimaalilaimennokset valmistetaan 9 cm3:iin puolinestemäisen MPA:n fysiologista liuosta. Tätä varten 1 cm 3 testisuspensiota syötetään ensimmäiseen koeputkeen 9 cm 3 puolinestemäisen agarin kanssa ensimmäisestä putkesta sen jälkeen, kun 1 cm 3 testisuspensiota on sekoitettu perusteellisesti, siirretään toiseen jne. . ja sitten kustakin laimennuksesta 0,1 ml levitettiin MPA:lla petrimaljassa olevan kalvosuodattimen pinnalle. Lisäksi 3 laimennusta laitettiin yhteen petrimaljaan. Sen jälkeen petrimaljoja viljeltiin ylösalaisin termostaatissa 37 °C:ssa 48 tuntia. Elävien bakteerisolujen määrän määrittämiseksi pesäkkeet laskettiin agarpisaroina. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittämiseksi kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä kerrottiin viljelmän laimennusasteella seuraavan kaavan mukaisesti:

missä x on mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä,

a - kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä,

n on laimennusaste.

Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä, määritetty menetelmällä 1 - (9 × 10 2) ja menetelmällä 2 - (10 × 10 2), ei eronnut merkittävästi.

Esimerkki 2. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määritys lihasta. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määritys suoritettiin kahdella tavalla: Menetelmä 1 (prototyyppi) - Analyysiä varten liha-peptoniagar kaadetaan lasi- tai muovisiin petrimaljoihin (halkaisijaltaan 9 cm). Näytteenotto elintarvikkeista suoritettiin voimassa olevien säädösasiakirjojen (GOST 9958-81. Makkaratuotteet ja lihatuotteet. M., 1982) mukaisesti. Suspension valmistamiseksi punnittu annos elintarviketuotteita laitettiin homogenisaattorin steriiliin pulloon (lasiin) ja lisättiin nelinkertainen 0,85 % natriumkloridiliuos. Homogenointi suoritettiin sähkösekoittimessa. Ensin materiaali murskattiin paloiksi veitsien hitaalla pyörimisnopeudella, sitten 15 000-20 000 rpm 2,5 minuutin ajan. Ravintoalustaan ​​ymppäämistä varten suspensio otettiin steriilillä asteikolla varustetulla pipetillä 15 minuutin huoneenlämpötilassa altistuksen jälkeen. 1 ml suspensiota sisältää 0,2 g tuotetta. Valmistettiin 6 laimennosta tutkitusta suspensiosta fysiologiseen natriumkloridiliuokseen: natriumkloridin suolaliuosta kaadetaan 9 cm3 steriileihin koeputkiin. Sitten 9 cm3:n fysiologiseen natriumkloridiliuokseen valmistetaan testisuspension desimaalilaimennokset. Tätä varten 1 cm 3 tutkittavaa suspensiota syötetään ensimmäiseen koeputkeen, jossa on 9 cm 3 natriumkloridia, ensimmäisestä putkesta, kun on sekoitettu perusteellisesti 1 cm 3 tutkittua suspensiota, se siirretään toiseen jne. . ja sitten kustakin laimennuksesta 0,1 ml lisättiin petrimaljalle (yhteensä 6 maljaa). Sen jälkeen petrimaljoja viljeltiin ylösalaisin termostaatissa 37 °C:ssa 48 tuntia. Elävien bakteerisolujen määrän määrittämiseksi pesäkkeet laskettiin agarpisaroina. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittämiseksi kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä kerrottiin viljelmän laimennusasteella seuraavan kaavan mukaisesti:

missä x on mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä,

a - kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä,

n on laimennusaste.

Menetelmä 2 (ehdotettu), joka käsittää liuoksen valmistamisen laimennusta varten (0,6-0,8 % suolaliuosta puolinestemäistä MPA:ta ja 0,6-0,8 % suolaliuosta puolinestemäistä MPA:ta) ja liha-peptoniagaria siirrostusta varten; analyysi; tulosten kirjanpito.

Analyysiä varten liha-peptoniagar kaadetaan lasi- tai muovipetrimaljoihin (halkaisijaltaan 9 cm), ja agar jäähtymisen jälkeen asetetaan sen pinnalle 5-6 kalvosuodatinta steriileillä pinseteillä. Näytteenotto elintarvikkeista suoritettiin voimassa olevien säädösasiakirjojen (GOST 9958-81. Makkaratuotteet ja lihatuotteet. M., 1982) mukaisesti. Suspension valmistamiseksi punnittu annos elintarviketuotteita laitettiin homogenisaattorin steriiliin pulloon (lasiin) ja lisättiin nelinkertainen 0,85 % natriumkloridiliuos. Homogenointi suoritettiin sähkösekoittimessa. Ensin materiaali murskattiin paloiksi veitsien hitaalla pyörimisnopeudella, sitten 15 000-20 000 rpm 2,5 minuutin ajan. Ravintoalustaan ​​ymppäämistä varten suspensio otettiin steriilillä asteikolla varustetulla pipetillä 15 minuutin huoneenlämpötilassa altistuksen jälkeen. 1 ml suspensiota sisältää 0,2 g tuotetta. Valmistetut 6 laimennosta tutkitusta suspensiosta MPA:n fysiologiseen liuokseen: 0,6-0,8 % puolinestemäisen MPA:n fysiologista liuosta kaadetaan 9 cm3 steriileihin koeputkiin. Sitten 9 cm3:n puolinestemäisen MPA:n fysiologiseen liuokseen valmistetaan desimaalilaimennokset tutkitusta suspensiosta. Tätä varten 1 cm 3 testisuspensiota syötetään ensimmäiseen koeputkeen 9 cm 3 puolinestemäisen agarin kanssa ensimmäisestä putkesta sen jälkeen, kun 1 cm 3 testisuspensiota on sekoitettu perusteellisesti, siirretään toiseen jne. . ja sitten kustakin laimennuksesta 0,1 ml levitettiin MPA:lla petrimaljassa olevan kalvosuodattimen pinnalle. Lisäksi 6 laimennusta laitettiin kahteen petrimaljaan. Sen jälkeen petrimaljoja viljeltiin ylösalaisin termostaatissa 37 °C:ssa 48 tuntia. Elävien bakteerisolujen määrän määrittämiseksi pesäkkeet laskettiin agarpisaroina. Mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärän määrittämiseksi kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä kerrottiin viljelmän laimennusasteella seuraavan kaavan mukaisesti:

missä x on mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä,

a - kasvaneiden pesäkkeiden lukumäärä,

n on laimennusaste.

Kun oli viljelty petrimaljoissa 37 °C:ssa 48 tuntia, mesofiilisten aerobisten ja fakultatiivisten anaerobisten mikro-organismien lukumäärä, määritettynä menetelmällä 1 - (8 × 10 5) ja menetelmällä 2 - (7 × 10 5), ei eronnut merkittävästi.

Yllä olevista esimerkeistä voidaan nähdä, että näiden kahden menetelmän vertailevassa arvioinnissa ehdotetulla menetelmällä määritetty CFU-luku ei eronnut merkittävästi yleisesti hyväksytyllä menetelmällä määritetystä CFU-luvusta. Samaan aikaan kehitetyllä menetelmällä on useita etuja. Joten elävien solujen lukumäärän määrittämiseksi viidelle näytetyypille olivat: olemassa olevan mukaan - 98 min; ehdotetun menetelmän mukaan - 48 min. Ravintoalustan kustannukset olivat prototyypin mukaiset - 420 ml; ehdotetun menetelmän mukaan - 135 ml. Petrimaljojen määrä oli prototyypin mukainen - 28 kappaletta; ehdotetun menetelmän mukaan - 9 kappaletta.