Kotiravintola. Kasvis- ja liharuokia. Leipomo. Välipalat. Juomat
Bensiini pyreeni elintarvikkeissa. Benz a) pyreeni: sen ominaisuudet, syöpää aiheuttava vaikutus, sen määritysmenetelmät

Bensiini pyreeni elintarvikkeissa. Benz a) pyreeni: sen ominaisuudet, syöpää aiheuttava vaikutus, sen määritysmenetelmät

26.11.2019 Ravintola muistiinpanoja

4.1.2. Menetelmä bentso(a)pyreenin massaosuuden mittaamiseksi elintarvikeraaka-aineissa, elintarvikkeissa ja maaperässä korkean erotuskyvyn nestekromatografialla

Tarkoitus ja laajuus

Menetelmä on tarkoitettu bentso(a)pyreenin (BP) kvantitatiiviseen määritykseen elintarvikeraaka-aineista, elintarvikkeista ja maaperästä sen massaosuudessa, joka on ilmoitettu taulukossa. 1. Mittausalueen alaraja vastaa 1/2 toksiinin sallitusta tasosta (pitoisuudesta) tuotteissa ja raaka-aineissa, yläraja - viisi kertaa sallittu taso.

Benz (a) pyreeni on erittäin myrkyllinen syöpää aiheuttava yhdiste, ja sen sallittu pitoisuus elintarvikkeissa ja elintarvikeraaka-aineissa on määritelty terveyssäännöissä ja SanPiN 2.3.2.560-96:ssa.

Tekniikkaa voivat soveltaa Venäjän federaation valtion terveys- ja epidemiologisen valvonnan laitokset, muiden organisaatioiden laboratoriot ja elintarvikkeiden tutkimukseen, kemialliseen analysointiin ja sertifiointiin liittyvät yritykset. Metodologia ei ole arbitraasi.

Riisi. 11.14.

  • 1. Naftaleeni 9. Chryzen (0,17*)
  • 2. Asenafteeni (1,40*) 10. Bents(a)pyreeni
  • 3. Fluori (2,60*) 11. Benz(b)fluoranteeni (0,26*)
  • 4. Fenantreeni *2,40*) 12. Benz(c)fluoranteeni (0,10*)
  • 5. Antraseeni (0,13*) 13. Bents(a)pyreeni (0,2*)
  • 6. Fluoranteeni (0,74*) 14. Dibents(a,b)antraseeni
  • 7. Pyreeni (0,67*) 15. BeH3(g, h, i)nepHaen (0,21*)
  • 8. Bents(a)antraseeni (0,07*) 16. Indeno(1,2,3-cc1)pyreeni (0,26*)

Analyysiehdot:

Pylväs: Supelcosil® LC RAS ​​(250 mm x 2,1 mm; 5 um);

Gradientti: asetonitriili (A) 50-100 %, vesi (B) 50-0 %; 200 µl/min Lämpötila: 25°C Näytetilavuus: 10 µl Havaitseminen: Influenssa, ohjelman mukaan


Mittausvirheen ominaisuudet

BP:n massaosuuden mittaustuloksen suhteellisen virheen (±5) rajat (luottamustasolla 0,95) on esitetty taulukossa. 1.

Pöytä 1. Analysoidut kohteet, mittausalueet ja mittausten ominaisuudet

Tuoteryhmä (analysoitu kohde)

Sallittu sisältö ( IV X), mg/kg

BP-massaosuuden mittausalue, mg/kg

Kerroin

louhinta,

Suhteelliset virherajat (±8), %

Savustettu liha, kala ja rasvatuotteet

Mittauslaitteet, apulaitteet, materiaalit ja reagenssit

Mittauslaitteet

Nestekromatografit:

  • - Mikrokolonni "Milichrome-5", TU 25-7405.0009-89, versio 3 fluorimetrisellä (FlD) detektorilla (vaihtoehto 1).
  • - Isokraattinen tai gradienttinestekromatografi, esimerkiksi "Kpayeg" (Saksa), Venäjän federaation valtion mittauslaiterekisteri 16848-97 tai kromatografinen liite "VEZHKh-3", LLP "Lumex" (Pietari), varustettu FLD "Fluorat-02 -2M", LLP "Lumex", Venäjän federaation valtion mittauslaitteiden rekisteri 14093-99 (vaihtoehto 2).
  • - Isokraattinen tai gradienttinestekromatografi minkä tahansa tyyppisellä PLD:llä, esimerkiksi "Kpaerg" (Saksa), Venäjän federaation valtion mittauslaiterekisteri 16848-97 (vaihtoehto 3).

Kromatografiset kolonnit "Diasfer-110-S 16", TU 4215-001-05451931-94, CJSC "BioKhimMak ST" (Moskova), vakiokoot vastaavat kromatografisen järjestelmän muunnelmaa:

  • - 2 x 80 mm, dp = 5 - 7 µm (vaihtoehto 1)
  • - 2 x 150 mm, dp = 5 - 7 µm (vaihtoehto 2)
  • - 4 x 150 mm, dp = 5 - 7 µm (Vaihtoehto 3)

Laitteisto- ja ohjelmistokompleksi "MultiChrom-Spectrum", TU AZHRC

3.036.001, CJSC Ampersend (Moskova), tai mikä tahansa muu ohjelmisto, joka mahdollistaa kalibroinnin ja kvantitatiivisen määrityksen ulkoisella standardimenetelmällä.

GSO 7515-98 koostumuksen bentso(a)pyreenin asetonitriililiuoksesta, jossa bentso(a)pyreenin massapitoisuus on 100 μg/cm 3, AOZT "Ekros" (Pietari).

GSO 7064-93 koostumus bentso(a)pyreenin heksaaniliuoksesta, jossa bentso(a)pyreenin massapitoisuus on 100 ug/cm3, AOZT "Ekros" (Pietari).

Vaa'at laboratorion elektroniset 4 solua. tarkkuusmalli VLE 134, GOST 24104-88 tai muut.

100 µl:n mikroruiskut Hamiltonilta, malli Microliter #1710 tai vastaava.

Mikropipetit 0,5; 0,2; 0,1 ui; GOST 20292-74.

Mittosylinterit 2-25.2-50, 2-100 ja 2-500, GOST 1770-74.

Mittapullot 2-10-2, 2-100-2, GOST 1770-74.

Pipetit 1, 2, 5, 10 cm 3 , GOST 29227-91.

Reagenssit ja materiaalit

Asetonitriili nestekromatografiaan, OP-3 erittäin puhdas, TU 6-09-14-2167-84, rektifioitu.

Bi-tislattu vesi, TU 6-09-2502-77.

Heksaani, kemiallisesti puhdas, TU 6-09-3375-78, kuivattu Na:lla 2 S 04 , korjattu.

Bentseeni, kemiallisesti puhdas, GOST 5955-75, kuivattu Na:lla 2 S 04 , korjattu.

Vedetön natriumsulfaatti, kemiallisesti puhdas, GOST 4166-76.

Tiivistyspatruunat "Diapak": A-3, P-3, C; TU 4215-002-05451931-94, ZAO BioKhimMak ST (Moskova).

Apulaitteet

CJSC "BioKhimMak ST" (Moskova) tai muiden eluenttien suodatus- ja kaasunpoistojärjestelmä.

Supelcon 1,8 ja 5,0 cm 3:n lasipullot kalibrointi- ja analyysiliuoksille kierrekorkilla ja teflontiivisteillä, luettelonumerot 2-6951, 2-7037 ja

2-7039 tai vastaava.

Mikrosekoitin PPE-3, "Ekros" (Pietari).

Pyörivä haihdutin IR-1M2, TU 25-1173.102-84 tai muu.

Teräväpohjaiset pullot tulpilla, joiden tilavuus on 25, 10 ja 5 cm 3, GOST 25336.

Laite liuosten puhaltamiseen typpivirrassa, joka on varustettu BioMark-yhteisyrityksen (Lvov) tai muiden termostaattiohjatulla alumiinilohkolla (kuivailmakylpy).

Kalvosuodattimet, joiden dp = 0,4-0,5 µm.

Laite noin 7 mm Hg:n tyhjiön luomiseen. Taide. (vesisuihkupumppu, GOST 25336; Begemot vesirengastyhjiöpumppu, UVK-RK2/1, CJSC BioKhimMak ST, Moskova).

Tyhjiönäytteenkäsittelylaite (tyhjiöjakotukki) tai muu vähintään 10 cm 3:n näytteenvastaanottimilla.

Buechner-pullo, Bunsen-suppilo, jonka tilavuus on vähintään 500 ja 200 cm 3, GOST 1770.

Erotussuppilo, jonka tilavuus on 100 ja 500 cm 3, GOST 25336.

Tasapohjaiset tulpilla varustetut pullot, joiden tilavuus on 50, 100 ja 250 cm 3, GOST 25336.

Päärynänmuotoiset pullot tulpilla, joiden tilavuus on 50 ja 100 cm 3, GOST 25336.

Kartiomainen suppilo, jonka halkaisija on vähintään 10 cm, GOST 1770.

"Blue tape" -tyyppinen suodatinpaperi.

Puuvillaa, lääketieteellistä ei-steriiliä, puuvillaa.

Mittausmenetelmä

Tekniikka sisältää seuraavat päämenettelyt:

  • - ensisijainen uutto heksaanilla ja uudelleenuutto asetonitriiliin BP savustetun tuotteen näytteestä;
  • - BP:n primääriuutto asetonitriili-vesi-seoksella vilja- tai maanäytteestä;
  • - primaarisen uutteen väkevöinti ja puhdistus kiinteäfaasiuutolla;
  • - valmistetun näyteuutteen laimentaminen asetonitriili-vesi-seoksella;
  • - kromatografin kalibrointi liuosten mukaan, joiden BP:n massapitoisuuden arvo on tunnettu;
  • - valmistetun näyteuutteen liuoksen analysointi korkean erotuskyvyn nestekromatografialla (HPLC) fluoresenssisignaalin rekisteröinnin kanssa;
  • - määritetyn verenpaineen tunnistaminen retentioparametreilla;
  • - BP:n massapitoisuuden laskeminen rekisteröityjen analyyttisten signaalien ja kalibrointiominaisuuksien perusteella;
  • - BP:n massaosuuden laskeminen BP:n massapitoisuuden, elintarvikenäytteen massan ja valmistetun uutteen liuoksen tilavuuden perusteella.

Turvallisuusvaatimukset

Käytettävien kemiallisten yhdisteiden kanssa työskennellessä on noudatettava myrkyllisten, syövyttävien ja syttyvien aineiden kanssa työskentelyä koskevia turvallisuusvaatimuksia, GOST 12.1.018-86 ja GOST 12.1.004-76, paloturvallisuusvaatimukset, GOST 12.1.004 -76.

Jos BP-liuoksia joutuu iholle" tai esineiden pinnoille, ne on käsiteltävä vedellä ja pesuaineella ja sitten etyylialkoholilla. Liuokset tulee säilyttää jääkaapissa suljetussa pakkauksessa.

HPLC-järjestelmää käytettäessä ja vastaavia mittauksia suoritettaessa on noudatettava sähköturvallisuussääntöjä, GOST

12.1.019-79 ja laitteen käyttöohjeet.

Kuljettajan pätevyysvaatimukset

Henkilöt, jotka saavat työskennellä:

  • - kemianinsinöörin tai kemianteknikon pätevyys;
  • - kokemusta kemian laboratoriosta;
  • - jotka ovat suorittaneet asiaankuuluvat koulutuskurssit ja harjoittelut laboratorioissa, jotka on akkreditoitu suorittamaan analyyseja HPLC:tä käyttäen;
  • - saanut positiivisia tuloksia valvontatoimenpiteiden suorittamisen aikana.

Mittausehdot

Näytteiden valmistelu, liuosten valmistus, valmistus ja mittausten suorittaminen suoritetaan ympäristön lämpötilassa 18-25 °C, ilmanpaineessa 84,0-100,7 kPa (630-800 mm Hg) ja ilman kosteudessa enintään 80 % ( lämpötilassa 25 °C).

Laboratoriossa mitattaessa tulee täyttyä seuraavat ehdot: verkkojännite 220 ± 10 V, verkkotaajuus 50zh 1 Hz. Mittaukset suoritetaan laitteen kuvauksen ja käyttöohjeen suosittelemissa olosuhteissa.

Valmistautuminen mittauksiin

Lasitavarat

Käytetyt lasit huuhdellaan ennen jatkokäyttöä viimeisellä käytetyllä liuottimella ja pestään perusteellisesti kuumalla vedellä ja mahdollisella pesujauheella, huuhdellaan peräkkäin tislatulla ja kaksi kertaa tislatulla vedellä ja kuivataan. Puhtaat astiat säilytetään sulkemalla korkki- tai pumpulipuikolla.

Näytteenotto, varastointi ja käsittely

Näytteenotto ja keskiarvo suoritetaan kunkin tuotetyypin säädösasiakirjojen mukaisesti (GOST 13586.3-83, GOST 27668-88, GOST 9792-73, GOST 7631-85). Määritetty BP uutetaan savustettujen tuotteiden näytteistä uuttamalla kuivalla heksaanilla, jonka haihduttamisen jälkeen se uutetaan uudelleen asetonitriiliin. Kun BP uutetaan vilja- tai maanäytteistä, käytetään vesi-asetonitriilin seosta (16:84). BP:tä sisältävän primaarisen näyteuutteen myöhempi väkevöinti ja puhdistus suoritetaan alkuperäisen tuotteen luonteesta riippumatta kiinteän faasin uuton monimutkaisen kaavion mukaisesti käyttämällä kolmea väkevöintipatruunaa Diapak A-3, P-3, S .

Valmistetut näytteet (näytteiden uutteet) liuotetaan asetonitriili-vesi-seokseen (70:30).

Jokainen BP:n massaosuuden mittaus sisältää vähintään kahden näytteen valmistuksen ja kromatografisen analyysin.

Liuotinseosten valmistus

Liuotinseokset valmistetaan tilavuusmenetelmällä mittasylintereissä. Tarvittavat asetonitriilin ja veden määrät mitataan erillisillä mittasylintereillä ja sitten sekoitetaan. Uuttoaine A: asetonitriili-vesi (84:16).

Uuttoaineiden valmistus

Keskinäisesti kyllästetyn asetonitriilin ja heksaanin valmistamiseksi ravista noin 300 cm 3 asetonitriiliä ja 100 cm 3 heksaania erotussuppilossa, jonka tilavuus on 500 cm 3 . Liuottimien erottamisen jälkeen kerrokset otetaan erikseen: alempi kerros (asetonitriili kyllästetty heksaanilla - uuttoaine B) ja ylempi kerros (asetonitriilillä kyllästetty heksaani - uuttoaine C), välifaasi hylätään.

Eluenttien valmistus

HPLC-mittauksia varten asetonitriili-vesi-seokset valmistetaan seuraavissa suhteissa: (90:10) - eluentti 90, (84:16) - eluentti 84, (80:20) - eluentti 80, (70:30) - eluentti 70 Valmiit eluentit suodatetaan kalvosuodattimen läpi ja suoritetaan tyhjiö- tai lämpökaasunpoisto.

Kalibrointiliuosten valmistus

Asetonitriilissä olevan BP-liuoksen koostumuksen GSO (katso edellä) laimennetaan asetonitriili-vesi-seoksella (7:3) ennen käyttöä. Pipetti otettu

1,0 cm 3 kantaliuosta laitetaan mittapulloon, jonka tilavuus on 100 cm 3, ja liuotin lisätään merkkiin. Seuraavaksi tietyt tilavuudet saatua liuosta otetaan pipetillä, laitetaan mittapulloon, jonka tilavuus on 10 cm 3, ja liuotin lisätään merkkiin. Vastaavat laimentamiseen käytetyt liuosmäärät ja kalibrointiliuosten 2-5 (vaihtoehto 1) ja 3-7 (vaihtoehdot 2, 3) pitoisuudet on esitetty taulukossa. 2. Kun käytetään GSO:ta BP-liuoksen koostumuksesta heksaanissa (katso alla), liuottimen haihduttamisen jälkeen jäljempänä esitetyissä olosuhteissa kuiva jäännös liuotetaan uudelleen asetonitriiliin ja laimennetaan edellä kuvatulla tavalla ottaen huomioon sertifioidun liuoksen arvo. GSO:n pitoisuus.

Taulukko 2. Kalibrointiliuokset bentsopyreenin (BP) analyysissä

BP:n massapitoisuus (sertifioitu GSO-arvo), mcg/cm 3

Alkulaimennusliuos

kalibrointi

BP:n massapitoisuus, µg/cm3

*Ei käytetä kromatografisen järjestelmän suoraan kalibrointiin.

Kromatografisen järjestelmän valmistus

Kromatografi kytketään päälle ja valmistetaan käyttöä varten sen kuvauksen ja käyttöohjeen mukaisesti. Asenna kolonni "Diasfer-110-C 16" vakiokokoisina kromatografivaihtoehdon mukaisesti (katso yllä). Eluenttia, jossa on korkein asetonitriilipitoisuus, pumpataan kromatografisen järjestelmän läpi, kunnes ilmaisimen perusviiva on stabiloitunut, ja sitten sitä käsitellään gradientin alkuolosuhteissa "Analyysiolosuhteet"-osion asiaankuuluvien osien mukaisesti.

Väkevöintipatruunoiden valmistus

Tiivistyspatruunat Diapak A-3 ja P-3 valmistetaan työhön seuraavasti:

  • 1. 3 cm3 kuivaa Diapak A tai P sorbenttia kaadetaan 10 cm3:n polypropeenikoteloon, jonka alaosassa on vaihdettava suodatin. Kotelon tyhjää yläosaa käytetään suppilona näytteen tai eluentin levittämiseen.
  • 2. Kiinnitä patruuna pystysuoraan sopivaan imulaitteeseen ja napauta muodostamaan tasainen, vaakasuora sorbenttikerroksen pinta. Diapak A-3 -patruunan lopullista valmistelua varten riittää, että kiinnität sorbenttikerroksen pienellä pumpulipuikolla.
  • 3. Diapak P-3 -patruunan valmistamiseksi sorbentti pestään peräkkäin 10 cm 3:llä bentseeniä, asetonia ja uuttoaine A alhaisessa tyhjiössä (tippausnopeus enintään 1-2 tippaa sekunnissa), estäen ilman pääsyn sorbenttiin. Kun patruuna on täytetty asetonilla, sorbentin annetaan laskeutua, ylempi polymeerisuodatin viedään sisään, se tiivistetään sorbentin ylemmän kerroksen päälle ja pesua jatketaan. Saavuttuaan uuttoaine A taso 2-3 cm suodattimen yläpuolella, pesu lopetetaan ja patruuna suljetaan pohjatulpalla ja yläkannessa (säilytystä varten). Jos kasetti kuivuu vahingossa, patruuna pestään uuttoaine A. Ennen näytteen laittamista tulpat poistetaan ja vesi-asetonitriili-seoksen jäännökset johdetaan heikon tyhjiön avulla ylemmän suodattimen tasolle, jonka jälkeen testiliuos kaadetaan välittömästi. Uudelleenkäytettävän Diapak P-3 patruunan regenerointi suoritetaan samanlaisen järjestelmän mukaisesti, lukuun ottamatta ylemmän suodattimen poistamista.

Tiivistyspatruuna Diapak C valmistetaan työhön seuraavasti:

  • 1. Valmis polypropeenikapseli, jossa on 1 cm3 Diapak S -sorbenttia, suljetaan tulpilla. Tulppien poistamisen jälkeen patruuna valmistetaan työhön johtamalla sen läpi ruiskulla 5 cm 3 heksaania tippanopeudella 1-2 tippaa sekunnissa.
  • 2. Näyte levitetään painovoiman avulla käyttämällä suppilona tyhjää polypropeenirunkoa, jonka tilavuus on 10 cm 3 ja joka on kiinnitetty tiukasti Diapak C -kapselin yläosaan.

Näytteen valmistelu mittauksia varten

Bentso(a)pyreenin heksaaniuutto savustetun tuotteen näytteestä 10,0 g:n näyte savustetun tuotteen näytteestä jauhetaan huhmareessa, jossa on 30 g vedetöntä natriumsulfaattia. Seos siirretään kvantitatiivisesti 100 cm3:n tasapohjaiseen pulloon ja uutetaan 40 cm3:lla heksaania vähintään 30 minuuttia sekoittaen. Näytteen kokonaisrasvan primaarinen heksaaniuute dekantoidaan ja johdetaan 10 g vedettömän natriumsulfaatin läpi poistopulloon. Toistetaan uutto kahdesti kahdella tilavuudella 20 cm 3 heksaania ja johdetaan osa uutteesta kuivausaineen läpi samaan tislauskolviin. Haihduta heksaani pyöröhaihduttimessa enintään 35 °C:n lämpötilassa, kunnes haju häviää.

Kokonaisrasvauute liuotetaan 20 cm 3:een uuttoaine B, siirretään kvantitatiivisesti mittasylinteriin, jonka tilavuus on 50 cm 3, ja lisätään liuoksen tilavuus 40,0 cm 3:een samalla liuottimella.

20,0 cm 3 saadusta liuoksesta siirretään erotussuppiloon, jonka tilavuus on 100 cm 3 ja BP uutetaan uudelleen asetonitriiliin kolmella tilavuudella 20 cm 3 uuttoaine B. Joka kerta, kun faasit erottuvat täydellisimmin, otetaan alempi kerros (BP:n asetonitriiliuute) ja haihdutetaan pyöröhaihduttimessa lämpötilassa, joka ei ylitä 50 °C. °С 10-15 cm 3 tilavuuteen asti. Siirrä liuos kvantitatiivisesti (asetonitriiliä käyttämällä) 25 cm 3:n mittasylinteriin, lisää tilavuus 21,0 cm 3:een asetonitriilillä, lisää 4,0 cm 3 kahdesti tislattua vettä ja sekoita saatu seos huolellisesti. BP:n vesi-asetonitriiliuute.

Bentso(a)pyreenin uuttaminen vilja- tai maanäytteestä asetonitriili-vesi-seoksella

Osa 10-25 g näytettä siirretään tasapohjaiseen pulloon, lisätään 50-125 cm 3 uuttoaine A, tarkkailemalla tarkasti tuotteen näytteen suhdetta 1:5 uuttoaineen tilavuuteen ja sekoitettiin 1 tunti. suodatettu BP:n vesi-asetonitriiliuute Paperisuodattimen läpi Buchner-suppilolla tyhjiössä ja purista sakka pois suodattimesta.

Viljan tai savustetun tuotteen primaariuutteen esipuhdistus ja väkevöinti

Pujota kasetin läpi Diapak A-3 25,0 cm 3 ja sitten 3 cm 3 uuttoaine A tiputusnopeudella 2-3 tippaa sekunnissa vastaanottopulloon.

Kerätty eluaatti johdetaan valmistetun Diapak P-3 -patruunan läpi ja sitten 5 cm3 asetonitriiliä tiputusnopeudella 1-2 tippaa sekunnissa, huuhtelunesteet heitetään pois. BP:tä sisältävä kohdefraktio eluoidaan patruunasta bentseeni-asetonitriilin seoksella (1:1) tilavuudessa 7 cm3 tiputusnopeudella 1-2 tippaa sekunnissa tislauskolviin. Eluaatti haihdutetaan pyöröhaihduttimessa korkeintaan 50 °C:n lämpötilassa, kolviin lisätään 0,5 cm3 heksaania ja ravistellaan perusteellisesti mikrosekoittimessa, kunnes kuiva jäännös on täysin liuennut.

Maaperän primaarisen uutteen esipuhdistus ja väkevöinti

Pujota kasetin läpi Diapak A-3 5,0 cm 3 BP:n vesi-asetonitriiliuute, sitten 3 cm 3 uuttoaine A tiputusnopeudella 2-3 tippaa sekunnissa vastaanottopulloon. Siirrä eluaatti mittasylinteriin, jonka tilavuus on 25 cm 3, huuhtele pullo kahdella tilavuudella 5 cm 3 uuttoaine A ja lisää liuoksen tilavuus sylinterissä 20 cm 3 :een.

5,0 cm 3 laimennettua eluaattia johdetaan valmistetun Diapak P-3 -patruunan läpi ja sitten 5 cm 3 asetonitriiliä tiputusnopeudella 1-2 tippaa sekunnissa, huuhtelunesteet heitetään pois. BP:tä sisältävä kohdefraktio eluoidaan patruunasta bentseeni-asetonitriilin seoksella (1:1) tilavuudessa 7 cm3 tiputusnopeudella 1-2 tippaa sekunnissa tislauskolviin. Eluaatti haihdutetaan pyöröhaihduttimessa korkeintaan 50 °C:n lämpötilassa, kolviin lisätään 0,5 cm3 heksaania ja ravistellaan perusteellisesti mikrosekoittimessa, kunnes kuiva jäännös on täysin liuennut.

Uutteen hieno puhdistus

0,5 cm 3 näyteliuosta heksaanissa levitetään valmistettuun Diapak C -patruunaan painovoiman avulla, sitten pullo pestään kahdella 0,5 cm3:n heksaaniannoksella ja levitetään peräkkäin patruunalle, hylkäämällä kaikki pesut. BP eluoidaan bentseenillä 2,0 cm3:n tilavuudessa nopeudella 1-2 tippaa sekunnissa strippauspulloon ja haihdutetaan pyöröhaihduttimessa lämpötilassa, joka ei ylitä 50 °C. Liuota BP-näytteen uutteen kuiva jäännös asetonitriili-vesi-seokseen (7:3), jonka tilavuudet on ilmoitettu osissa "Mittausolosuhteet" kunkin kromatografisen järjestelmän muunnelman osalta (katso alla).

Graduaatio ja mittaukset

Kromatografin kalibrointi

Kromatografi kalibroidaan syöttämällä peräkkäin (BP-mittauksen olosuhteissa) kalibrointiliuosten nimellistilavuus (taulukko 2) niiden massapitoisuuksien nousevassa järjestyksessä. Kukin liuos injektoidaan kromatografiin vähintään kahdesti. Kun kromatografiajärjestelmä on säädetty oikein, pienimmän pitoisuuden omaavan kalibrointiliuoksen kromatogrammin piikin korkeuden tulisi ylittää peruskohinatason vähintään 10 kertaa.

Kromatogrammien matemaattisen käsittelyn jälkeen retentioparametrit ja piikkien pinta-alat kiinteät ja kalibrointiominaisuudet (GC) muodostetaan, mikä kuvastaa piikin pinta-alan keskiarvon riippuvuutta BP:n massapitoisuudesta kalibrointiliuoksessa.

Valvo kalibrointiominaisuuksien rakenteen oikeellisuutta.

Kalibrointikäyrä rakennetaan uudelleen kolonneja vaihdettaessa, huollon ja ennaltaehkäisevän huollon jälkeen, jolloin GC:n stabiilisuuden valvonnan tulokset ovat negatiiviset (katso alla).

Bentso(a)pyreenin määritys

Mittausolosuhteet (vaihtoehto 1)

Analyysiä varten valmistettu BP-näytteen uute liuotetaan 0,1 cm3:iin asetonitriili-vesi-seosta.

FMD:n ja UVPA:n toimintatilat asetetaan tietokoneen näppäimistöltä käyttöoppaan (HSS "MultiChrome-Spectrum") mukaisesti ja niitä ohjataan monitoreilla seuraavassa muodossa:

Fluorometrinen ilmaisin

  • viritysaallonpituus 296 nm;
  • emissioaallonpituus - valosuodatin nro 2 (yli 380 nm);
  • mittausaika 0,2 s.

Automaattinen annostelija

  • regenerointitilavuus 0,4 cm3;
  • näytetilavuus 0,04 cm3;
  • virtausnopeus 0,15 cm3/min;
  • rekrytointinopeus 0,3 cm 3 /min;
  • Verenpaineen retentioaika 11 min.
  • astioissa olevien eluenttien koostumus ja asetonitriiligradientin kokoamiskaavio on esitetty taulukossa. 3.

Taulukko 3 eluentteja

Mittausolosuhteet (vaihtoehto 2)

Analyysiä varten valmistettu (katso edellä) BP-näyteuute liuotetaan 0,5 cm3:iin asetonitriili-vesi-seosta.

  • suodatin virityslinjalla - "X4";
  • suodatin päästölinjalla - "KhZ";
  • näytetilavuus 0,02 cm3;
  • herkkyys on keskimääräinen;
  • tasoitus - 4;
  • "taustataso" valitaan kalibrointiliuoksen nro 3 testikromatogrammin rekisteröinnin tulosten perusteella.
  • virtausnopeus 0,2 cm3/min;
  • eluentti 84;
  • Verenpaineen retentioaika on noin 12 minuuttia.

Gradientin jakotila:

  • virtausnopeus 0,25 cm3/min;
  • eluentti 100 eluentissa 70 20 minuutissa;

Mittausolosuhteet (vaihtoehto 3)

Analyysiä varten valmistettu BP-näytteen uute liuotetaan 0,5 cm3:iin asetonitriili-vesi-seosta.

  • viritysaallonpituus 375 nm;
  • emissioaallonpituus 405 nm;
  • virtausnopeus 0,8 cm3/min;
  • näytetilavuus 0,02 cm3;
  • aikavakio 1,0 s.

Isokraattinen erotustila:

  • eluentti 84;
  • Verenpaineen retentioaika on noin 12 minuuttia;

Gradientin jakotila:

  • lineaarinen gradientti 30 - 70 % eluentti 100 eluentissa 70 20 minuutissa;
  • Verenpaineen retentioaika on noin 14 minuuttia.

Kromatogrammien hankinta ja käsittely

Näyteuuteliuos syötetään kromatografiin kahdesti. BP:n tunnistaminen suoritetaan näyteuutteen ja kalibrointiliuosten kromatogrammeissa olevien huippuretentioparametrien vertailun perusteella. Likimääräiset retentioparametrit on esitetty kohdassa "Mittausolosuhteet". Määritetyn yhdisteen luotettava tunnistaminen vastaa kalibrointiliuoksen ja näytteen retentioparametrien arvojen eroa, joka ei ylitä 0,2 minuuttia.

Uuteliuoksen laimennus

Suoritetaan siinä tapauksessa, että määritetyn BP:n massapitoisuus ylittää sen korkeimman massapitoisuuden kalibrointiliuoksissa. Uuteliuos laimennetaan kahdesti (laimennussuhde, laim = 2) ottamalla yhtä suuret tilavuudet tätä liuosta ja asetonitriili-vesi-seosta (70:30) ja sekoittamalla jälkimmäistä. Jos yksittäinen laimennos ei poista "off-asteikkoa", menettely toistetaan (laimennusaste, laim = 4).

Mittaustulosten käsittely

Laske huipun pinta-alan (kromatografin lähtösignaalin) keskiarvo kahdelle näyteuutteen liuoksen injektiolle kromatografiin. Ohjaa lähtösignaalien konvergenssia (katso alla).

Kalibrointiriippuvuuden mukaan saadaan BP:n massapitoisuuden arvo liuoksesta, joka vastaa piikin pinta-alan keskiarvoa.

BP:n massaosuus (I^), mg/kg, i:nnessä näytteessä (määrityksen tulos) lasketaan kaavalla

jossa Cbp on analyytin massapitoisuus BP:n i:nnen näytteen uutteen liuoksessa, μg/cm 3 (laskettu kalibrointiriippuvuuden mukaan, piikin pinta-alan keskiarvon perusteella); Vp- BP:n /:nnen näytteen uutteen liuoksen tilavuus, cm 3; R- verenpaineen uuttoaste näytteen valmisteluvaiheessa taulukon mukaisesti. 2; M ekv- puhdistukseen ja myöhempään kromatografiseen määritykseen käytetyn BP:n vesi-asetonitriiliuutteen osuutta vastaavan näytteen osan massa - näytteen ekvivalenttimassa, joka on 5,0 g (vilja, savustetut tuotteet) tai 0,25 g (maaperä).

Uutetta laimentaessa (katso edellä) BP:n massaosa ( W,-, mg/kg) /-:nnessä ulottuvuudessa lasketaan kaavalla

Missä wj- kaavalla (II.1) saatu arvo, dil - laimennusaste (katso edellä).

Laske BP:n massaosuuden keskiarvo kahdelle näytteelle (analyysitulos):

Ohjaa BP:n massaosuuden määrityksen tulosten lähentymistä (katso alla).

Mittaustulosten rekisteröinti

Määritettävän kohteen BP:n massaosuuden analyysin (mittauksen) tulos esitetään muodossa

Missä W- BP:n massaosuus laskettuna kaavalla (II.3).

Jos verenpainetta ei havaita, mittaustulos esitetään muodossa

jossa P "ds on BP:n sallittu pitoisuus taulukon 1 mukaan.

MVI-virheenhallinta

Kromatografin lähtösignaalien konvergenssiohjaus

Valvonta suoritetaan kunkin näytteen kalibroinnin ja analyysin aikana suhteessa lähtösignaaleihin (BP-huippujen pinta-alojen arvot kromatogrammeissa), jotka on saatu kahdella liuoksen injektiolla kromatografiin. Ohjaustuloksen katsotaan olevan tyydyttävä, jos lähtösignaalien alue aritmeettiseen keskiarvoon verrattuna ei ylitä 8 %.

Kalibrointikäyrän rakenteen oikeellisuuden valvonta

Valvonta suoritetaan jokaisen kalibroinnin yhteydessä. Kontrollitulos tunnustetaan tyydyttäväksi, jos kunkin ":nnen kalibrointiliuoksen ehdot täyttyvät

Missä sj- BP-huipun alueen keskiarvo y:nnelle kalibrointiliuokselle, c.u.; S)- y:nnen kalibrointiliuoksen BP:n massapitoisuuden kalibrointiominaisuutta vastaava huipun alueen arvo, c.u.

Kalibrointikäyrän vakauden hallinta

Valvonta suoritetaan päivittäin ennen työskentelyn aloittamista analysoitujen näytteiden kanssa kontrolliliuoksella, jota käytetään kalibrointiliuoksena, jonka BP:n massapitoisuus vastaa sen sallittua pitoisuutta analysoitavassa kohteessa.

Kontrollitulos tunnustetaan tyydyttäväksi, jos ehto täyttyy

jossa C ki - BP:n massapitoisuuden arvo kontrolliliuoksessa, joka on saatu kalibrointiominaisuudella piikin pinta-alan keskiarvolle, µg/cm 3 ; Kun to - BP:n massapitoisuuden arvo kontrolliliuoksessa taulukon mukaisesti. 2.

Määritystulosten lähentymisen valvonta

Valvonta suoritetaan jokaisen analyysin (mittauksen) yhteydessä. Kontrollin tulos katsotaan tyydyttäväksi, jos määritystulosten vaihteluväli aritmeettiseen keskiarvoon (analyysin tulokseen) ei ylitä 10 %.

Virheenhallinta additiivisella menetelmällä

Valvonta suoritetaan:

  • a) ennen tämän MVI:n soveltamisen alkamista - ehdottomasti;
  • b) kun BP:n massaosuuden määrittämisessä ilmenee epäilyttäviä tuloksia;
  • c) laboratorion sisäisen valvonnan suunnitelmien mukaisesti;
  • d) laboratorion toimintaa valvovien organisaatioiden pyynnöstä.

Lisäaine muodostetaan kalibrointiliuoksen perusteella. Lisäarvo (D, mg/kg) valitaan siten, että BP:n massaosuus näytteessä kasvaa 1,5-2,5 kertaa. Laskenta suoritetaan kaavan mukaan

Missä C D- BP:n massapitoisuus kalibrointiliuoksessa, µg/cm3; Vo- näytteeseen lisätyn BP-kalibrointiliuoksen tilavuus, cm3; M fw- analyysiä varten otetun näytteen ekvivalenttipaino, g.

Lisäaine lisätään vilja- tai maanäytteen primääriuutteeseen taulukon mukaisesti valmistetun kalibrointiliuoksen muodossa. 2. Lisäaine lisätään savustetun tuotteen primääriuutteeseen liuoksena, jonka pitoisuus on samanlainen heksaaniin. Tätä varten BP-koostumuksen GRM heksaanissa (katso edellä) laimennetaan (ottaen huomioon sertifioidun pitoisuusarvon korjaus) kalibrointiliuosten valmistusmenettelyn mukaisesti (katso edellä), käyttämällä heksaania liuottimena ja vaaditun pitoisuuden liuoksen saaminen. Kun käytetään BP:n GSO-koostumusta asetonitriilissä liuottimen haihduttamisen jälkeen, kuiva jäännös liuotetaan uudelleen heksaaniin ja laimennetaan heksaanilla, kuten edellä on kuvattu.

Kahden luonnollista BP:tä sisältävän näytteen ja kahden BP:tä lisätyn näytteen analyysi suoritetaan samoissa olosuhteissa (yksi instrumentti, yksi kalibrointiominaisuus, yksi käyttäjä). Kontrollitulos tunnustetaan tyydyttäväksi, jos ehto täyttyy

Missä W D- BP:n massaosuus näytteissä, joissa on lisäaine, mg/kg; W- BP:n massaosuus näytteissä ilman lisäainetta, mg/kg ( W D Ja W- massaosuuden keskiarvot kahdelle näytteelle, joilla on positiiviset tulokset konvergenssikontrollista).

Esimerkki tämän tekniikan soveltamisesta käytännön ekoanalytiikassa voi toimia kromatogrammina ja kalibrointikäyränä elintarvikkeiden bentso(a)pyreenin määrittämiseen (kuvat 11.15 ja 11.16).

Tulokset esineiden bentso(a)pyreenin määrityksen virheen hallinnasta lisäysmenetelmällä fluorimetrisellä ilmaisulla 375 Ex/405 Et (variantti 3).

Lisäaineen määrä vastaa 0,5:tä sallitusta bentsapyreenipitoisuudesta (0,0005 mg/kg - vilja ja savustetut tuotteet, 0,01 mg/kg - maaperä).


Riisi. 11.15.

Komponentin asteikko: BaP Korrelaatiokerroin: 0,999667 Vastaus: Pinta-ala

Vertailukanava 365 Ex/405 Em

Kaava Y = Ki X

Arvot 100 ( W D - L-P)/D ovat 10 ja 16 % näytteille 1 ja 2. Alkuperäisessä vehnäjauhonäytteessä määritettyä yhdistettä on 0,00009 kg/kg.

Näyte 1 - 0,00064 mg/kg Näyte 2 - 0,00067 mg/kg

  • Yleisessä tapauksessa kalibrointikäyrä on muotoa S = AC + B, missä S on piikin pinta-ala, c.u.; C on epäpuhtauden massapitoisuus, µg/cm3; A ja B ovat kertoimia.

Todistus nro 30-08, päivätty 3.4.2008
FR.1.31.2008.01033

1. Tutkimuskohteet

Tätä mittausmenetelmää sovelletaan savustettuun lihaan, savustettuun kalaan ja rasvaisiin tuotteisiin, ja se määrittää bentso(a)pyreenin massapitoisuuden korkean erotuskyvyn nestekromatografialla fluorimetrisellä ilmaisulla.

2. Mittausalue

MPC bents(a)pyreenille rasvaisissa, savustetuissa liha- ja savustettu kalatuotteissa on 1 µg/kg.

Menetelmällä saadaan bentso(a)pyreenin massapitoisuuden mittaustulokset taulukossa 1 esitetyillä alueilla.

Taulukko 1. Bentso(a)pyreenin massapitoisuuden mittausalueet

Tuotetyyppi massaalue
pitoisuus, mcg/kg		 MPC,
mcg/kg
rasvaiset tuotteet 0,5 – 2,0 1,0
savustetut lihatuotteet 0,5 – 2,0 1,0
savustetut kalatuotteet 0,5 – 2,0 1,0

3. Näytteen valmistelu

Tuotenäytteiden näytteenotto, säilytys ja varastointi suoritetaan GOST 7631:n, GOST 9792:n, TU:n ja muiden määräysten mukaisesti, jotka koskevat tietyntyyppisten tuotteiden näytteenottoa.

Näytteen valmistelu koostuu vaiheista: näytteenotto (näytettä esijäähdytetään miinus 12-18 °C lämpötilassa 30 min), jauhaminen, homogenointi vedettömällä natriumsulfaatilla, homogenisoidun näytteen uutto heksaanilla pullossa käyttäen ultraäänikylpy, kiinteän sakan spontaani saostus (1-2 min), uutteen rasvanpoisto pakastimessa (silikageeliä lisätään sylinteriin, uute lisätään, sylinterin sisältö laitetaan pakastimeen), puhdistamalla supernatantti heksaanikerros pidättymättömällä kiinteän faasin uutolla (Strata Silica Si-1 -patruunoilla) *, poistamalla eluaatti ilmavirrassa tai inertissä kaasussa.

* Huomautus. Kun alkuperäisen analysoitavan tuotteen rasvapitoisuus on alle 5 %, alkuperäiseen näyteuutteeseen on pakastamisen jälkeen lisättävä pieni määrä eluointireagenssia - etyyliasetaattia (0,1 ml - 6 ml puhdistettua uutetta).


4. Kromatografisen analyysin suorittaminen

4.1. Laitteet ja olosuhteet bents(a)pyreenin kalibrointiliuosten HPLC-analyysiin, valmistetut tuotenäytteet.

Bentso(a)pyreenin kromatografisessa analyysissä on tarpeen käyttää isokraattista korkean suorituskyvyn nestekromatografiajärjestelmää, jossa on fluorimetrinen tunnistus.

Analyysin suorittamista varten valmistetaan alustavasti kalibrointiliuokset bentso(a)pyreenin GRM-liuoksesta heksaanissa tai bentso(a)pyreenin GRM-liuoksesta asetonitriilissä (liuotin puhalletaan pois, standardinäyte liuotetaan uudelleen heksaaniin ); suorittaa näytteen valmistelu; valmistele laite käyttöä varten.

Laitteet:

  • nestekromatografi "Stayer", jossa on fluorimetrinen detektori;
  • henkilökohtainen tietokone, johon on asennettu ohjelmisto "MultiChrome for Windows XP" versio 1.5 tai 2x.
  • isokraattinen tila;
  • kolonni: Luna C18(2) 150 x 3,0 mm 3 um (Phenomenex, USA);
  • suojapylväs: C18 4x3,0 mm (Phenomenex, USA);
  • liikkuva faasi: asetonitriili/vesiliuos (75:25);
  • virtausnopeus: 0,3 ml/min;
  • silmukan tilavuus: 10 μl;
  • lämpötila: 50 °C;
  • RFU-alue: 0,01;
  • havaitseminen: fluorimetrinen (λex: 365±2 nm; λem: 400-460 nm).

    • Kalibrointi suoritetaan kalibrointiliuoksilla (koko määritettyjen pitoisuuksien alueella) vähintään kahden viikon välein, samoin kuin käytettäessä uutta reagenssierää, vaihdettaessa kolonneja ja kromatografin korjauksen jälkeen.

    4.2. Bentso(a)pyreenin kvantitatiivisen pitoisuuden määrittäminen tuotenäytteestä.

    Tuotenäytekomponentin (bentso(a)pyreenin) kvantitatiivisen sisällön määrittämiseksi suoritetaan yhden kalibrointiliuoksen kromatografinen analyysi, jota seuraa valmistetun näytteen kromatografinen analyysi. Mittausten luotettavuuden vuoksi sekä kalibrointiliuoksen että valmistetun näytteen kromatografinen analyysi suoritetaan vähintään 2 kertaa peräkkäin.

    Käyttämällä asennettua ohjelmistoa - "MultiChrome for Windows XP" raportissa tai huipun yläpuolella (riippuen "VIEW"-asetusten asetuksista) mittauksen lopussa tulos määritetään automaattisesti pitoisuuden muodossa kromatografiin syötetty näyte (mutta ei tutkimusta varten otetussa alkuperäisessä näytteessä!).

    Tuloksen saamiseksi on suoritettava vähintään kaksi rinnakkaista mittausta (saada kaksi kromatogrammia). Mittaustulos otetaan aritmeettisena keskiarvona analysoidun näytteen tiivisteen bentso(a)pyreenipitoisuudesta C xp, μg/l (laskettu kahdesta näytteen bentso(a)pyreenin massapitoisuuden arvosta. analysoidun näytteen konsentraatti C 1 ja C 2).
    Bentso(a)pyreenin massaosuus analysoidussa näytteessä (alkuperäisessä näytteessä) X, mcg/kg lasketaan kaavalla:

    Missä:
    C xp - bentso(a)pyreenipitoisuuden keskiarvo, joka on saatu kromatografian tuloksena kahdessa rinnakkaisessa mittauksessa [ng/ml];
    V 1 – alkuperäisen uutteen tilavuus, joka on itse asiassa yhtä suuri kuin primääriuutosta otetun heksaanin tilavuus (50 ml);
    V 2 - pakastettaviksi otetun uutteen (osa alkuperäisestä) tilavuus (30 ml);
    V 3 on uutteen tilavuus (osa uutteesta jäädytyksen jälkeen) otettuna SPE:lle (6 ml) [ml];
    V 5 on lopullisen uutteen tilavuus, josta osa syötetään kromatografiin (noin 3 ml) [ml];
    K näytteenotto - näytteenottokerroin, jossa otetaan huomioon uuttamista varten otetun (natriumsulfaatin kanssa sekoitettuna) tuotteen näytteen massan osuus analyysiä varten otetun näytteen kokonaismassasta. Kaikissa tapauksissa se on 0,736;
    K jäätyä on bentso(a)pyreenin hävikkikerroin jäätymisen aikana. Kaikille tutkittujen tuotteiden luokille tämä kerroin on sama ja on 0,95;
    K extra 1 on primaarisen nesteuuton kerroin heksaanilla. Kaikkien tutkittavien tuoteluokkien osalta se on sama ja yhtä suuri kuin 0,95;
    K TFEextr.2– bentso(a)pyreenin kiinteän faasin uuttokerroin, 0,95;
    m pr. – maaperä tai analysoitavaksi otettu maaperä [g].

    Polysykliset aromaattiset hiilivedyt: fysikaalis-kemialliset ominaisuudet ja biologiset vaikutukset. Katsaus bentsapyreenin määritysmenetelmiin. Bentsapyreenin määritys vedestä korkean erotuskyvyn nestekromatografialla fluoresenssidetektiolla.

    Lähetä hyvä työsi tietokanta on yksinkertainen. Käytä alla olevaa lomaketta

    Opiskelijat, jatko-opiskelijat, nuoret tutkijat, jotka käyttävät tietopohjaa opinnoissaan ja työssään, ovat sinulle erittäin kiitollisia.

    Lähetetty http://www.allbest.ru/

    Kurssityö sisältää 30 sivua, 1 osan, 4 alaosaa, 14 kappaletta, 6 taulukkoa ja 9 kuvaa. Kurssin lopussa on lähdeluettelo, joka koostuu 14 kohdasta.

    Tutkimukseni kohteena on bentso(a)pyreeni, sen ominaisuudet, syöpää aiheuttava vaikutus sekä menetelmät sen määrittämiseksi. Kurssityössä esitellään muun muassa kaasukromatografiaa massaspektroskooppisella detektiolla ja korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa fluoresenssidetektiolla. Lisäksi tarkasteltiin ilmaisimia, jotka soveltuvat bentso(a)pyreenin analyyttisen signaalin tallentamiseen ja perusteltiin yhden tai toisen ilmaisimen käytön rationaalisuutta.

    Myös kurssityössä esitetään menetelmät bentso(a)pyreenin määrittämiseksi vedestä, joka koostuu näytteen valmistelusta, kromatografin kalibroinnista, analysoinnista ja tietojen tallentamisesta. Paperissa esitetään näillä menetelmillä saadut kromatogrammit.

    Avainsanat: POLYSYKLISET AROMAATTISET HIILIVEDIT, BENTSO(A)PYREENI, SUORITUSKYKYINEN NESTEKROMATOGRAFIA, KAASUKROMATOGRAFIA, FLUORESSENTTIEN TUNNISTUS.

    Tazi-kurssityö sisältää 30 sivua, 1 osio, 4 alaosaa, 14 pistettä, 6 masia ja 9 numeroa. Kursiivityön reunassa annetaan luettelo kirjallisuudesta alkaen kohdasta 14.

    Celta minun tutkimuksessani bentso (a) pyreeni, negatiiviset ominaisuudet, karsinogeeniset vaikutukset, ja jotenkin menetelmää sille ei ole määritetty. Kurssityö sisältää mm. kaasukromatografia massaspektrikäyrällä ja tehokromatografia fluoresenssikäyrällä. Tällaisia ​​ilmaisimia pidetään, jotka soveltuvat bentso(a)pyreenistä tulevan signaalin analyyttiseen vastaanottoon ja perusteltuun käyttöön ilmaisimessa.

    Joten altaan työskentelyn aikana esittelemme menetelmät bentso(a)-pyreenin määrittämiseksi vedestä, joka koostuu näytteen valmistuksesta, kromatografilla kalibroinnista, analysoinnista ja tietojen rekisteröinnistä. Peruskirja, jossa esitetään tiedot, hankitaan metodologian mukaan.

    Tärkeimmät ajatukset: POLYSYKLINEN AROMAATTINEN VESI, Benz(A)PYREENI, ERITTÄIN TEHOKAS TEKNAKROMATOGRAFIA, KAASUKROMATOGRAFIA, fluorisenssiaukko.

    Kurssityö annettiin kattaa 30 puolta, 1 split, 4 alikansiota, 14 pistettä, 6 taulukkoa ja 9 piirustusta. Kurssin lopussa kirjallisuusluettelo, joka koostuu 14 pisteestä.

    Tietoja "tutkimuksestani bents(a)pyreeniin, sen tehoon, karsinogeenisuuteen sekä sen tunnistamismenetelmiin. Kurssityössä sellaiset menetelmät kuin kaasukromatografia massaspektroskopialla ovat erittäin tehokkaita, mutta kromatografia on erittäin tehokasta ja fluoresoivaa ilmaisimet, jotka soveltuvat rekisteröimään analyyttinen signaali bentso (a) pyreeniin ja toisen ilmaisimen rationaalisuus on perusteltu.

    Lisäksi kurssityössä esitetään metodologia bentso(a)pyreenin merkitsemiseksi vedessä, joka koostuu näytteen valmistelusta, kromatografin kalibroinnista, analysoinnista ja tietojen rekisteröinnistä. Robotit esitetään kromatogrammeilla, jotka on otettu näistä menetelmistä.

    Avainsanat: POLITISYKLISET AROMAATTISET HIILIILIhydraatit, Benz(A)PYREENI, ERITTÄIN TEHOKAS RIDINNAKROMATOGRAFIA, KAASUKROMATOGRAFIA, fluoresenssien tunnistus.

    SYMBOLIT

    JOHDANTO

    1. KIRJALLISUUS

    1.1.1 Yleistä tietoa

    1.1.2 PAH-yhdisteiden alkuperä

    1.1.4 Biologinen vaikutus

    1.1.5 Bents(a)pyreeni. Yleistä tietoa

    1.2 Bentsapyreenin määritysmenetelmät

    1.2.1 Kaasukromatografia

    1.3 Bentsapyreenin määritys vedestä HPLC:llä

    1.3.2 Näytteen valmistelu

    1.3.3 Valmistuminen

    1.3.4 HPLC-analyysin suorittaminen

    1.3.5 Tietojen tallentaminen ja käsittely

    1.4.2 Verenpaineen kvantifiointi

    KIRJASTUS

    SYMBOLIT

    PAH-yhdisteet - polysykliset aromaattiset hiilivedyt

    BP - bentso(a)pyreeni

    MPC - suurin sallittu pitoisuus

    MPC SS - keskimääräinen päivittäinen suurin sallittu pitoisuus

    HPLC - korkean suorituskyvyn nestekromatografia

    GC - kaasukromatografia

    LC - nestekromatografia

    NPC - normaalifaasikromatografia

    RPCH - käänteisfaasikromatografia

    LLE - neste-neste-uutto

    OFS - käänteisfaasisorbentti

    TLC - ohutkerroskromatografia

    JOHDANTO

    Polysykliset aromaattiset hiilivedyt (PAH) kuuluvat pysyvien orgaanisten yhdisteiden ryhmään. Niillä on voimakkaita syöpää aiheuttavia ominaisuuksia. Yksi vaarallisimmista PAH-yhdisteiden edustajista on bentso(a)pyreeni (BP).

    Benz (a) pyreeni löydettiin vuonna 1933, myöhemmin, vuonna 1935, suoritettiin tutkimuksia, jotka vahvistivat sen karsinogeenisuuden. Nykyään bentso(a)pyreeni luokitellaan 1. vaaraluokan syöpää aiheuttavaksi aineeksi. Sillä on mutageenisia ominaisuuksia. Pienikin verenpaineen pitoisuus vaikuttaa negatiivisesti ihmiskehoon. Ilman verenpaineen pitoisuus, joka ylittää suurimman sallitun pitoisuuden (MAC) pitkäaikaisessa altistumisessa, voi aiheuttaa keuhkosyövän. Siksi sen havaitseminen ja määrittely on akuutti ongelma. Sen fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien perusteella sen määrittämiseen kehitettiin useita samanlaisia ​​menetelmiä, jotka eroavat vain näytteenoton ja näytteen valmistelun vaiheista. Työni tarkoituksena oli perehtyä PAH-yhdisteiden ja BP:n ominaisuuksiin, tutkia menetelmiä PAH-yhdisteiden erottamiseen ja menetelmiä verenpaineen määrittämiseen.

    1. KIRJALLISUUS

    1.1 Polysykliset aromaattiset hiilivedyt (PAH)

    1.1.1 Yleistä tietoa

    PAH-yhdisteet ovat bentseenisarjan suurimolekyylisiä orgaanisia yhdisteitä, joita on yli 200 edustajaa. Ne sisältävät 2-7 bentseenirengasta. PAH-yhdisteet ovat laajalle levinneitä luonnossa ja ne ovat pysyviä ajan myötä. Niillä on syöpää aiheuttavaa ja mutageenista aktiivisuutta. Myrkyllisyytensä ja syöpää aiheuttavien ominaisuuksiensa vuoksi ne luokitellaan ensisijaisiksi saasteiksi. PAH-yhdisteiden määritystä käytetään ekologisissa ja geokemiallisissa tutkimuksissa. Niistä myrkyllisimpiä ovat 3,4-bents(a)pyreeni ja 1,12-bentsperyleeni, jotka määritetään erityisen usein ympäristön kohteissa.

    1.1.2 PAH-yhdisteiden alkuperä

    PAH-yhdisteet ovat fossiilisten polttoaineiden polton ei-toivottu sivutuote. Ne muodostuvat luonnossa abiogeenisten prosessien seurauksena. Maaperän humuskomponenteista vapautuvia PAH-yhdisteitä pääsee biosfääriin vuosittain tuhansia tonneja. Mutta suurin osa näistä syöpää aiheuttavista aineista on peräisin ihmisen aiheuttamista prosesseista.

    Kivihiiltä pidetään seoksena valtavasta määrästä polykondensoituneita aromaattisia bentseeniytimiä, joissa on minimaalinen vetypitoisuus. Kun näitä aineita poltetaan uuneissa, voimalaitoksissa, polttomoottoreissa, nämä yhdisteet hajoavat. Alhaisissa palamislämpötiloissa ja riittämättömässä ilmakehän hapen saannissa muodostuu reaktiivista asetyleeniä ja alifaattisia hiilivetyjä. Asetyleeni polymeroituu butadieeniksi, joka sitten muodostaa aromaattisen hiilivedyn ytimen. Kun lisätään olemassa oleviin aromaattisiin ytimiin, syntyy PAH-yhdisteitä.

    Epätäydellinen palaminen tuottaa hiukkasia - noki. PAH-yhdisteet adsorboituvat sen pinnalle ja pääsevät ympäristöön.

    1.1.3 PAH-yhdisteiden fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet

    Useimmat PAH-yhdisteet ovat kiteisiä yhdisteitä (joitakin naftaleenijohdannaisia ​​lukuun ottamatta), joilla on korkea sulamispiste. PAH-yhdisteet liukenevat huonosti veteen. Kun siirrytään orgaanisiin liuottimiin, niiden liukoisuus kasvaa ja riippuu niiden molekyylipainosta. Yleensä aromaattisten renkaiden ja alkyyliradikaalien lukumäärän kasvaessa PAH-yhdisteiden liukoisuus laskee.

    Useimmat PAH-yhdisteet imevät intensiivisesti UV-säteilyä (300–420 nm) ja valohapettuvat nopeasti ilmakehässä muodostaen kinoneja ja karbonyyliyhdisteitä.

    1.1.4 Biologinen vaikutus

    PAH-yhdisteet pääsevät elimistöön hengitysteiden, ihon tai ruoansulatuskanavan kautta.

    PAH-yhdisteiden vuorovaikutuksen tyyppi kehon kanssa riippuu pääasiassa itse hiilivedystä. Pohjimmiltaan, kun PAH-yhdisteet päätyvät elimistöön, entsyymit muodostavat epoksiyhdisteen, joka reagoi guaniinin kanssa, mikä häiritsee DNA-synteesiä, aiheuttaa häiriöitä tai johtaa mutaatioihin, jotka edistävät syövän kehittymistä.

    Yksi myrkyllisimmistä PAH-yhdisteistä, kuten aiemmin mainittiin, on BP. Lisäksi PAH-yhdisteiden karsinogeeninen aktiivisuus on 70-80 % verenpaineen vaikutuksesta. Siksi BP:n läsnäoloa elintarvikkeissa voidaan käyttää muiden PAH-yhdisteiden esiintymisen arvioimiseen.

    1.1.5 Bents(a)pyreeni. Yleiset luonteenpiirteet

    Benz (a) pyreeni (C 20 H 12) on kemiallinen yhdiste, polysyklisten hiilivetyjen ryhmän edustaja (kuva 1.1), ensimmäisen vaaraluokan aine. Se muodostuu nestemäisten hiilivetyjen, kiinteiden ja kaasumaisten polttoaineiden palamisen aikana (vähemmässä määrin kaasumaisten polttoaineiden palamisen aikana).

    Kuva 1.1 Bentso(a)pyreenin rakennekaava.

    BP on keltaisia ​​levyjä tai neuloja. Se liukenee hyvin ei-polaarisiin liuottimiin, esimerkiksi tolueeniin, bentseeniin, ksyleeniin. Se liukenee hieman vähemmän polaarisiin liuottimiin, mutta käytännössä liukenematon veteen.

    BP kerääntyy pääasiassa maaperään, harvemmin veteen. Maaperästä se tulee kasveihin jatkaen liikettään troofista ketjua pitkin. Jokaisella seuraavalla tasolla bentso(a)pyreenipitoisuus kasvaa suuruusluokkaa.

    BP on tyypillinen kemiallinen syöpää aiheuttava aine ja vaarallinen ihmisille jopa pieninä pitoisuuksina, koska sillä on ominaisuus kerääntyä ihmiskehoon. Bentso(a)pyreenin MPC eri kohteissa on esitetty taulukossa 1.1. Lisäksi BP:llä on mutageenisia ominaisuuksia, ts. se voi aiheuttaa mutaatioita.

    Taulukko 1.1 Bentso(a)pyreenin MPC eri ympäristöissä

    Objektin nimi

    MAC, mcg/kg

    savustetut tuotteet

    Viljat

    Juomavesi

    Vesisäiliöt

    Ilmassa keskimääräinen päivittäinen suurin sallittu pitoisuus (MPC CC) on 0,1 µg/100 m 3 .

    1.2 Bentso(a)pyreenin määritysmenetelmät

    Tärkeimmät PAH-yhdisteiden määritysmenetelmät ovat korkean erotuskyvyn käänteisfaasinestekromatografia (HPLC), jossa on fluorimetrinen tai spektroskooppinen detektio, ja kaasukromatografia (GC), jossa on massaselektiivinen, liekki-ionisaatio, elektronien sieppaus tai fotoionisaatiodetektio.

    BP:n määrittämiseen käytetään myös Shpolsky-ilmiöön perustuvaamää. Vaikutuksen ydin on siinä, että alhaisissa lämpötiloissa jotkin polyatomiset molekyylit antavat korkearesoluutioisia kvasilineaarisia luminesenssispektrejä. Tämän menetelmän etuna on alhaiset vaatimukset puhdistusasteelle ja herkkyydelle. Mutta laitteiston monimutkaisuus rajoittaa merkittävästi BP:n määritelmää.

    Kromatografia on aineiden erotus-, analyysi- ja fysikaaliskemiallinen tutkimusmenetelmä, joka perustuu aineen vyöhykkeen liikkumiseen sorbenttikerrosta pitkin liikkuvan faasin virtauksessa, jossa sorptio- ja desorptiotoimia toistetaan useita. Erottaminen johtuu yksittäisten aineiden jakautumisvakioiden eroista näiden kahden faasin välillä. Kromatografian tärkein piirre on prosessin dynaaminen luonne, jossa molekyylien tai hiukkasten pitoisuusjakaumassa esiintyy gradientteja.

    Yleinen kaavio seoksen komponenttien erottamiseksi on esitetty kuvassa 1.2.

    Kuva 1.2 Kaavio kromatografisen prosessin toteuttamisesta

    Kromatografisten menetelmien etuja ovat mahdollisuus toteuttaa samanaikaisesti useita parametreja, jotka karakterisoivat seoksen komponenttien erottamista, tunnistamista ja kvantifiointia. Siten kromatografia on monikanavainen tiedonlähde.

    Liikkuvan faasin aggregaatiotilasta riippuen kromatografiset menetelmät jaetaan kaasu- ja nestekromatografiaan.

    Kaasukromatografia puolestaan ​​sisältää kiinteän (stationaarisen) aggregaatiotilasta riippuen kaasu-neste- ja kaasu-kiinteäfaasikromatografian.

    Nestekromatografia jaetaan neste-neste, neste-kiinteä faasi ja neste-geeli.

    1.2.1 Kaasukromatografia

    GC on eräänlainen kromatografia, jossa liikkuva faasi on kaasu- tai höyrytilassa - inertti kaasu. Se on kantajakaasu. Kiinteä faasi on korkean molekyylipainon omaavaa nestettä, joka on kiinnitetty huokoiselle kantajalle tai pitkän kapillaariputken seinämille.

    GC on yleinen menetelmä hajoamatta haihtuvien aineseosten erottamiseen. Seoksen komponentit liikkuvat kromatografiakolonnin läpi kantokaasun kanssa. Tässä tapauksessa seos jaetaan toistuvasti kantokaasun ja kiinteän faasin välillä. Erottaminen johtuu seoksen komponenttien erilaisesta liukoisuudesta kiinteään faasiin. Kun aineet poistuvat kolonnista, ne tallennetaan detektorilla.

    Ilmaisin on jatkuva laite, joka rekisteröi analyyttisen signaalin. GC:lle on ehdotettu noin 60 tyyppistä tunnistusjärjestelmää. Taulukossa 1.2 on lueteltu GC:issä yleisimmin käytetyt ilmaisimet.

    Taulukko 1.2 Kaasukromatografiset ilmaisimet

    Ilmaisimen nimi

    Toimintaperiaate

    Lämmönjohtavuuden perusteella

    Analyytin ja kantajakaasun välinen lämmönjohtavuuden ero kirjataan

    Ilmaisimen nimi

    Toimintaperiaate

    Elektroninen tartunta

    Kantokaasun β-hiukkasten tai suurienergisten elektronien säteilytyksen synnyttämien lämpöelektronien vangitseminen analyytillä

    UV

    UV-valon absorptio tietyllä analyytin kromoforilla

    mikroaaltouuni plasma

    Mikroaaltoplasmassa olevan analyytin viritys ja valon emissio aineessa olevan alkuaineen ominaisaallonpituudella

    Liekin fotometrinen

    Analyytin viritys liekissä ja valon emissio riippuen aineessa olevan alkuaineen tyypistä

    Atomiabsorptiospektrometri

    Terminen sumutus, jota seuraa valon absorptio tietyllä aallonpituudella

    Sähkökemiallinen

    Analysoitujen aineiden imeytyminen nestevirtauksella ja niiden sähkökemiallinen havaitseminen virtauksessa

    IR-spektrometri

    Analyytin valon absorptio IR-alueella

    Liekin ionisaatio

    Ionien muodostuminen ja rekisteröinti liekissä analysoitujen aineiden palamisen aikana

    Massaspektrometri

    Molekyyli- ja fragmentti-ionien muodostuminen elektroniiskulla tai kemiallisella ionisaatiolla

    fotoionisaatio

    Ionien fotokemiallinen muodostus ja rekisteröinti kovan UV-säteilyn vaikutuksesta analyytiin

    Liekki-ionisaatioilmaisin on herkkä, mutta ei-selektiivinen verenpaineelle. Siksi sitä käytetään vain yksinkertaisten seosten analysointiin.

    Elektronien sieppausdetektori on sekä herkkä että selektiivinen verenpaineelle, mutta sen käyttö on vaikeaa korkean vasteen elektrofiilisille yhdisteille vuoksi.

    Valoionisaation käyttö on lupaavaa verenpaineen määrittämisessä, mutta se ei ole löytänyt laajaa leviämistä toiminnan epävakauden ja korkean laitekustannusten vuoksi.

    GC massaspektrometrisellä detektiolla on paras ratkaisu bentsapyreenin määrittämiseen monimutkaisissa seoksissa

    Massaspektrometrin toimintaperiaate on jakaa fragmentteja tai ioneja massan mukaan. Ionisointiprosessia käytetään neutraalien molekyylien muuttamiseksi ioneiksi. Elektroniiskua käytetään useimmiten orgaanisten yhdisteiden ionisointiin. Lisäksi käytetään kemiallista ionisaatiota, joka perustuu ioni-molekyylireaktioiden esiintymiseen. Biologisten molekyylien, polymeerien ja muiden aineiden, joita ei voida siirtää kaasufaasiin hajoamatta, tutkimiseen käytetään erityisiä ionisaatiotyyppejä.

    GC massaspektroskooppisella ilmaisulla on ainoa menetelmä, joka mahdollistaa sisäisten standardien käytön kvantitatiivisissa määrityksissä. Standardiaineina käytetään PAH-yhdisteiden 2H- ja 13C-isomeeriseoksia. Painon muutos ja se, että vertailuaineilla on lähes samat ominaisuudet kuin leimaamattomilla PAH-yhdisteillä, helpottaa tunnistamista.

    Yksi massaspektrometrien vähäisistä haitoista on detektorin vasteen pieni lineaarisuus. Siksi perinteinen massaspektrometri korvataan lentoaikamittarilla. Sen ominaisuus on, että lyhyessä ajassa on mahdollista saada täydellinen yhdisteiden massaspektri ja tarkka massojen mittaus 0,0001 a.m.u asti.

    Lentoaikamassaspektrometrin ja kaasukromatografian yhdistelmä mahdollistaa monimutkaisten seosten hyvän komponenttien erottamisen ja alhaiset havaintorajat.

    1.2.2 Nestekromatografia

    Nestekromatografia (LC) on menetelmä monimutkaisten aineiden erottamiseen ja analysointiin, jossa neste toimii liikkuvana faasina. Toisaalta liikkuva vaihe suorittaa kuljetustoiminnon, ts. siirtää ei-sorboituvaa ainetta ja toisaalta säätelee tasapainovakioita ja siten retentiota vuorovaikutuksen seurauksena stationaarifaasin ja erotettavien aineiden molekyylien kanssa.

    LC:ssä erotukset tapahtuvat useimmiten huoneenlämpötilassa. Analysoitu näyte ruiskutetaan kolonniin ja eluentti johdetaan sen läpi. LC:ssä liikkuvan faasin luonne on olennainen. Tästä johtuen erilaiset yhdistelmät pienestäkin määrästä kiinteää vaihetta ja suuren määrän liikkuvaa vaihetta mahdollistavat erilaisten analyyttisten ongelmien ratkaisemisen.

    Klassisessa nestekromatografiassa analyysiä suoritetaan pitkään, koska näytteen syöttönopeus on alhainen. Tämä menetelmä soveltuu seoksen komponenttien alustavaan erottamiseen. Useimmissa tapauksissa käytetään HPLC:tä. Nopea massansiirto korkealla erotusteholla mahdollistaa molekyylien, makromolekyylien ja ionien määrittämisen HPLC:llä. Erot klassisen LC:n ja HPLC:n välillä on esitetty taulukossa 1.3.

    Taulukko 1.3 Kokeelliset erot klassisen ja korkean suorituskyvyn LC:n välillä

    Ominaista

    Klassinen LC

    HPLC

    Paine, atm

    Atm murto-osista. jopa 2 atm.

    Virtausnopeus, mm/min

    Eron kesto

    Useista tunteista useisiin päiviin

    Useista minuuteista useisiin tunteihin

    Laitteet

    Kaiutin ja tarvikkeet

    Kromatografi

    Erotuksen tyyppi

    Valmisteleva erottelu

    Analyyttinen jako

    Havaitseminen

    Yksilön havaitseminen

    jakeet analyyttisin menetelmin

    Ilmaisimen kanssa

    Testiaineen määrä

    Muutamasta mikrogrammasta useisiin kiloihin

    Useista ng:ista useisiin mikrogrammiin

    HPLC on pylväskromatografiamenetelmä, jossa liikkuva faasi on nestettä, joka liikkuu kiinteällä faasilla (sorbentti) täytetyn kromatografiakolonnin läpi. HPLC-kolonneille on ominaista korkea hydraulinen vastus tuloaukossa.

    Aineiden erotusmekanismista riippuen erotetaan seuraavat HPLC-vaihtoehdot:

    a) jakelu;

    b) ioninvaihto;

    c) yksinomainen;

    d) kiraalinen;

    e) adsorptio.

    Partitiokromatografia perustuu aineen jakautumiseen kahden sekoittumattoman nesteen välillä toistuvan uuton tapaan. Nestemäisen liikkuvan faasin ohittaessa tapahtuu erottuminen johtuen seoksen komponenttien erilaisesta liukoisuudesta nestemäiseen kiinteään faasiin.

    Ioninvaihtokromatografiassa liuoksessa kationeiksi ja anioneiksi dissosioituneiden aineiden seoksen molekyylit erottuvat sorbentin läpi liikkuessaan määritettävissä olevien ionien ja sorbentin ioniryhmien välisen vuorovaikutuksen erilaisen voimakkuuden vuoksi.

    Kokoekskluusiokromatografiassa aineiden molekyylit erotetaan koon mukaan, koska niillä on erilainen kyky tunkeutua stationaarifaasin huokosiin. Tässä tapauksessa suurimmat molekyylit, jotka voivat tunkeutua kiinteän faasin vähimmäishuokosten määrään, poistuvat ensimmäisinä kolonnista, ja aineet, joilla on pieni molekyylikoko, poistuvat viimeisenä.

    Kiraalisessa kromatografiassa optisesti aktiiviset yhdisteet erotetaan yksittäisiksi enantiomeereiksi (peili-isomeereiksi).

    Adsorptiokromatografiassa aineet erotetaan niiden erilaisen adsorboitumis- ja desorboitumiskyvyn vuoksi kehittyneen pinnan omaavan sorbentin pinnasta.

    Liikkuvan ja kiinteän faasin polariteetista riippuen adsorptiokromatografia jaetaan normaalifaasikromatografiaan (NPC) ja käänteisfaasikromatografiaan (RPC).

    NPC käyttää polaarista adsorbenttia ja ei-polaarista liikkuvaa faasia, kun taas RPC käyttää ei-polaarista adsorbenttia ja polaarista liikkuvaa faasia.

    Vaikka nestekromatografia on menetelmä näytteen erottamiseksi komponenteiksi, nykyaikainen nestekromatografi sisältää erotusjärjestelmän lisäksi järjestelmän kunkin komponentin sisällön kvantitatiiviseen mittaamiseen, ts. tunnistusjärjestelmä. Kromatografin kaavio on esitetty kuvassa 1.3.

    bentsapyreeni nestekromatografinen hiilivety

    Kuva 1.3 Kaavio nestekromatografista

    1 - pumppu liikkuvan faasin syöttämiseksi kolonnin läpi

    2 - annostelija näytteen syöttämiseksi kolonniin

    3 - erotinpylväs

    4 - ilmaisin - laite analyyttisen signaalin saamiseksi

    5 - prosessointijärjestelmä - analyyttinen signaalinmuunnin ihmiselle sopivaan muotoon

    Analyyttisen signaalin rekisteröimiseksi, kuten aiemmin mainittiin, käytetään ilmaisimia. LC:ssä käytetään erilaisia ​​havaitsemismenetelmiä. Joitakin niistä käsitellään taulukossa 1.4.

    Taulukko 1.4 Detektorit nestekromatografiassa

    Ilmaisimen nimi

    Toimintaperiaate

    Spektrofotometrinen

    Eluointiprosessin aikana eluaatin optinen tiheys mitataan tietyllä aallonpituudella

    Fluorimetrinen

    Imeytyneen fluoresoiva säteily

    Ilmaisimen nimi

    Toimintaperiaate

    Refraktometrinen

    Aineen pitoisuuden määrittäminen riippuen liikkuvan faasin taitekertoimesta poikkeavasta taitekertoimesta

    Haihtuva laservaloilmaisin

    Toimintaperiaate perustuu liikkuvan faasin muodostavien kromatografisten liuottimien ja analysoitavien aineiden höyrynpaineeroihin.

    HPLC:ssä BP:n määrittämiseen käytetään fluorimetristä ilmaisinta, joka on selektiivinen bentsapyreenin suhteen ja jolla on korkea herkkyys. Tällaisen ilmaisimen toimintaperiaate perustuu absorboituneen valon fluoresoivan emission mittaamiseen. Mittaukset suoritetaan pääasiassa UV-alueella tietyn aineryhmän maksimiabsorption aallonpituudella. Fluoresoivan säteilyn aallonpituus on aina suurempi kuin absorboituneen valon aallonpituus. Koska ilmaisu suoritetaan nollaintensiteetistä, fluorimetriset ilmaisimet ovat herkempiä kuin absorptioilmaisimet.

    HPLC:n ja massaspektroskooppisen ilmaisimen yhdistelmää ei ole käytetty bentsapyreenin määrittämisessä. Tämä johtuu siitä, että uutteiden puhtaudelle asetetaan korkeat vaatimukset, ts. analyysin kesto pitenee näytteen työläs valmistelun vuoksi. Lisäksi laitteet ovat melko kalliita eivätkä riittävän valikoivia ja herkkiä.

    1.3 Bents(a)pyreenin määritys vedestä HPLC:llä

    1.3.1 Mittauslaitteet, apulaitteet, reagenssit

    Mittauksiin käytetään fluorimetrisellä detektorilla varustettua Agilent 1200 HPLC -kromatografia (kuva 1.4), joka tarjoaa viritysaallonpituusalueen välillä 270-365 nm ja fluoresenssin rekisteröinnin alueella 390-460 nm.

    Kuva 1.4 Agilent 1200 HPLC

    Kromatografiakolonni täytetään OFC:n sorbentilla. Kokeen olosuhteissa kolonnin tehokkuuden tulisi olla vähintään 5000 teoreettista levyä.

    Näytteen valmistukseen käytetään 2000 cm3:n erotussuppiloa, pyöröhaihdutinta, vesihaudetta, vesisuihkupumppua, n-heksaania, natriumkloridia ja sulfaattia sekä asetonitriiliä.

    Kalibrointiliuosten valmistamiseksi pullot, joiden tilavuus on 25 ja 50 cm 3 ja mittapipetit, joiden tilavuus on 1, 2, 5 cm 3, bents(a)pyreeniliuosta, jonka pitoisuus on c = 1,0 μg/cm 3 ja käytetään asetonitriiliä.

    1.3.2 Näytteen valmistelu

    Liquid-Liquid -uuttoa (LLE) käytetään bentso(a)pyreenin uuttamiseen vedestä. Bentso(a)pyreeni uutetaan n-heksaanilla. Tätä tarkoitusta varten valikoitua vettä, jonka tilavuus on 1000 cm 3, johdetaan erotussuppiloon, jonka tilavuus on 2000 cm 3 ja 25-30 cm 3 n-heksaania ja 20 cm 3 natriumkloridia (NaCl) pitoisuudella c = 0, lisätään 25 g/cm3 ja uutto suoritetaan ravistaen seosta 10-15 minuuttia. Tämän jälkeen vesikerros erotetaan ja uutto suoritetaan vielä kahdesti lisäämättä NaCl:a. Uutteiden yhdistämisen ja kuivaamisen jälkeen ajetaan kuivausaineen läpi, joka on suppilo, jossa on vähintään 2 cm korkea natriumsulfaattikerros.Uuttoaineena voidaan käyttää dikloorimetaania, jonka tilavuus on sama kuin n-heksaanilla.

    Uuton jälkeen uute haihdutetaan 3 - 5 cm 3:n tilavuuteen pyöröhaihduttimessa - laitteella nesteiden nopeaan poistamiseen tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös siirretään koeputkeen, jonka tilavuus on 10 - 15 cm 3 ja siihen lisätään n-heksaania, minkä jälkeen liuos haihdutetaan kuiviin vesisuihkupumpun tyhjiössä asettamalla koeputki vesihauteeseen n. 40 - 50 °C lämpötilassa. Jäännös liuotetaan 0,2 - 0,5 cm3 asetonitriiliin. Saatua tiivistettä säilytetään vähintään 15 minuuttia.

    1.3.3 Valmistuminen

    Asteikko suoritetaan 5 standardiliuoksen mukaan, joiden pitoisuus on 0,002; 0,01; 0,02; 0,05 ja 0,1 ug/cm3. Kalibrointiliuosten valmistus on kuvattu taulukossa 1.5.

    Taulukko 1.5 Kalibrointiliuosten valmistus

    s, ug/cm3

    c0, ug/cm3

    Liuokset täytettiin merkkiin asti asetonitriilillä.

    Jokaisesta liuoksesta kirjataan vähintään kaksi kromatogrammia. Kuva 1.5 esittää bentso(a)pyreenin kromatogrammia, jonka pitoisuus on 0,002 µg/cm3.

    Kuva 1.5 Bents(a)-pyreenin kromatogrammi, jonka pitoisuus on 0,002 μg / cm 3

    Saatujen alueiden välinen ero saa olla enintään 7 % niiden aritmeettisesta keskiarvosta.

    Saatujen tietojen perusteella muodostetaan kalibrointikäyrä (kuva 1.6) piikin pinta-alan riippuvuuden muodossa massapitoisuudesta. Kalibrointikäyrän on oltava lineaarinen. Jokaisen liuoksen osalta kalibrointiominaiskäyrän mukaan mitatun massapitoisuuden poikkeama määritetystä arvosta ei saa ylittää 12 %. Jos poikkeama ylittää määritellyn arvon, kalibrointi toistetaan. Kalibrointi ei suoriteta ainoastaan ​​ennen mittauksia, vaan myös kolonnin vaihdon jälkeen tai kromatografin huoltotöiden aikana.

    Kuva 1.6 Huipun alueen kalibrointiriippuvuus bentso(a)pyreenin pitoisuudesta (r 2 = 0,998)

    1.3.4 HPLC-analyysin suorittaminen

    Bentsapyreenin kromatografinen määritys suoritetaan Agilent 1200 HPLC -kolonnissa, kolonnin tehokkuuden tulisi olla vähintään 5000 teoreettista levyä bentsapyreenipiikin perusteella. Pylvään sisähalkaisija on 2 mm. Kolonni täytetään käänteisfaasisorbentilla (RPS). Tässä määritelmässä käytettiin esikolonnia, joka suorittaa suojatoiminnon. Esipylvään sisähalkaisija on 2 mm, se on täytetty samalla OFS:llä.

    OFS:nä käytetään silikageelin pohjalta saatuja sidottufaasisia sorbentteja. Tässä määritelmässä sorbentteina käytettiin oktadekyylisilikageeliä (C 18), jonka hiukkaskoko on 5 μm ja hydrofobista mikrohuokoista hypersilloitettua polystyreeniä, jonka hiukkashalkaisija on 3,2 μm ja keskimääräinen huokoshalkaisija 20–40 E. Tämä sorbentti on kemiallisesti stabiili. pH = 2-7. Erotustehokkuuden takaavat sorbenttihiukkasten suuri pinta-ala sekä sorbenttikoostumuksen tasaisuus ja tiheä yhtenäinen pakkaus. Tällaisen sorbentin kapasiteettikerroin (k) on 9,86.

    Liikkuva faasi on asetonitriilin ja veden seos. Valmistele eluentti tilavuussuhteessa 8:2. Laseihin, joiden tilavuus on 1000 cm 3, lisätään 200 cm 3 vettä ja täytetään merkkiin asti asetonitriilillä. Välittömästi ennen käyttöä eluenttia säilytetään kaasunpoistoa varten vähintään 4 tuntia. Nopeampaa kaasunpoistoa varten säiliö, jossa on eluentti, tyhjennetään yhdistämällä se vesisuihkupumppuun ja asettamalla se ultraäänihauteeseen. Eluentti syötetään silmukan annosteluventtiilillä (injektorilla), jonka silmukan tilavuus on 10 mm 3, liikkuvan faasin virtausnopeus on 200 mm 3 /min.

    Näissä olosuhteissa kromatografia kestää 20-30 minuuttia.

    1.3.5 Tulosten rekisteröinti ja käsittely

    Bentsopyreeni havaitaan fluoresenssidetektorilla. On suositeltavaa rekisteröidä kromatogrammi viritysaallonpituudella l ex = 365 nm ja rekisteröintiaallonpituudella l. = 400 - 460 nm.

    Herkkyyden lisäämiseksi tässä tekniikassa ohjelmoitiin virityksen ja emission aallonpituudet fluoresenssin avulla. Ohjelmointitila näkyy taulukossa 1. 6.

    Taulukko 1.6 Ohjelmointitila käytettäessä fluoresoivaa ilmaisinta

    Vesianalyysistä saatu kromatogrammi on esitetty kuvassa 1.7.

    Kuva 1.7 BP-pitoisuuden kromatogrammi vedessä

    Bentsapyreenin huippu määräytyy retentioajan mukaan, koska tämä on bentso(a)pyreenin laadullinen ominaisuus. Bentso(a)pyreenipitoisuuden kvantifioimiseksi lasketaan piikin pinta-ala. Sitten kalibrointikäyrän mukaan sen pitoisuus löydetään.

    Jos bentso(a)pyreenipitoisuus ylittää standardiliuoksen enimmäispitoisuuden, analysoitu liuos laimennetaan ja näyte analysoidaan uudelleen.

    Bentsapyreenin määrityksen herkkyys tällä menetelmällä on 0,01 µg/DM3.

    1.4 Bents(a)pyreenin määritys vedestä GC:llä

    1.4.1 Näytteenotto ja valmistelu

    Tärkeä osa analyysiä on näytteen valinta ja valmistelu. Vettä otetaan useita kertoja usean päivän välein. Sen jälkeen vesi suodatetaan ja otetaan 0,5 litran näyte. Natriumkloridia lisätään näytteeseen ja säilytetään jääkaapissa enintään vuorokauden ajan.

    Luotettavien tietojen saamiseksi BP erotetaan näytteestä LLE-menetelmällä. Uuttoaine on dietyylieetteri. Uutto suoritetaan kolme kertaa. Ensimmäiset kaksi kertaa aine uutetaan 50 ml:n tilavuuteen uuttoainetta. Kolmannen kerran uuttoaineen tilavuus on 30 ml. Kaikki uutteet yhdistetään ja haihdutetaan pyöröhaihduttimessa, kunnes eetteri on kokonaan poistettu. Saatu näyte liuotetaan 2 ml:aan bentseeniä.

    Ennen BP:n kvantitatiivista määritystä seoksen komponentit erotetaan ohutkerroskromatografialla (TLC).

    TLC on kromatografinen menetelmä, joka perustuu ohuen adsorbenttikerroksen käyttöön kiinteänä faasina.

    Ennen erotusta levy upotetaan 4-prosenttiseen kofeiiniliuokseen kloroformissa ja aktivoidaan uunissa 100 °C:n lämpötilassa. Epäpuhtauksien poistamiseksi levyltä se pestään jäähdytyksen jälkeen kloroformilla ja aktivoidaan uudelleen uunissa 30 minuuttia 100 asteen lämpötilassa noin S.

    Bentseeniin liuotetut näytteet asetetaan levylle ja kromatografoidaan. Eluointiaine on sykloheksaanin ja n-heksaanin seos tilavuussuhteessa 16:1.

    1.4.2 Kvantifiointi

    Tämän menetelmän mukainen kvantitatiivinen analyysi suoritetaan kaasu-nestekromatografialla liekki-ionisaatiodetektorilla. Analyysissä käytettiin kromatografia "Tsvet - 500" (kuva 1.8), jossa oli liekki-ionisaatiodetektori.

    Kuva 1.8 Kaasukromatografi "Color - 500"

    Kantokaasu tässä määrityksessä oli typpi. Typpeä syötettiin virtausnopeudella 3 ml/min. Analyysissä käytettiin kapillaarikvartsikolonnia, jonka koko oli 25 m × 0,32 mm. Pysyvänä faasina käytettiin metyylisilikoniöljyä OV-101, jonka kalvonpaksuus oli 0,4 um. Analyysi suoritettiin lämpötilan ohjelmointitilassa 210 - 300 °C nopeudella 4 °C/min. 1 µl näyte ruiskutettiin mikroruiskulla.

    Kuva 1.9 esittää tällä menetelmällä saadun BP-kromatogrammin.

    Kuva 1.9 GC:llä saatu BP:n kromatogrammi (3-BP)

    Kvalitatiivisesti BP määritettiin retentioajan perusteella verrattuna standardinäytteen retentioaikaan, joka oli 28 minuuttia.

    Kvantitatiivisesti verenpaine määritetään ulkoisella standardimenetelmällä. Voit tehdä tämän rakentamalla kalibrointikäyrän useille standardinäytteille, joiden pitoisuus on 1–20 ng/ml. Huipun korkeutta käytettiin analyyttisenä signaalina.

    Benz (a) pyreeni on PAH-yhdisteisiin liittyvä 1. vaaraluokan syöpää aiheuttava aine. Sitä löytyy maaperästä, vedestä, ilmasta, ruoasta, ja kun se joutuu kehoon, se kerääntyy. Siksi sen määrittäminen eri kohteissa on prioriteetti.

    Verenpaineen MPC on melko alhainen, joten sen määrittämiseen käytetään herkkiä menetelmiä. Sen määrityksen vaikeus piilee myös siinä, että näyte voi sisältää BP:n lisäksi sen isomeerejä, kuten bents(e)pyreeniä ja peryleeniä, joiden retentioaika on lähes sama kuin BP:n. Toisin sanoen isomeerien läsnäolo vaikeuttaa aineen tunnistamista. Tämä ongelma ratkaistaan ​​erottamalla seos ensin TLC:llä sekä käyttämällä tavallisia BP-näytteitä.

    Tässä kurssityössä pohdittiin useita kromatografisia menetelmiä, jotka soveltuvat bentso(a)pyreenin määritykseen. Kirjallisuuden kanssa tehdyn esityöskentelyn jälkeen menetelmien valinta sen kvantitatiiviseen määritykseen oli perusteltu. Menetelmän perusteella valittiin menetelmät ja esitetään näillä menetelmillä saadut kromatogrammit.

    KIRJASTUS

    1. Traven VF Orgaaninen kemia. Oppikirja yliopistoille: 3 osana / VF Traven - M .: BINOM. Knowledge Lab, 2013. --. - T. 2. - 2013. - 517 s.

    2. Grechishcheva N. Yu. Humiinihappojen vuorovaikutus polynukleaaristen aromaattisten hiilivetyjen kanssa: kemialliset ja toksikologiset näkökohdat: opinnäytetyö ... kemian tohtorin tutkintoa varten. Tieteet: 02.00.13 / N. Yu. Grechishcheva. - M., 2000. - 157 s.

    3. Pat. 2466406 Venäjän federaatio. Menetelmät bentso(a)-pyreenin kvantitatiiviseen määrittämiseen virtsassa nestekromatografialla / Zaitseva N. V., Ulanova T. S., Kornazhitskaya T. D., Kislitsina A. V., Pshenichnikova E. O., Permyakova T. S. - - No. 1 455131 joulukuu 20.10.11; publ. 10.11.12, tiedote Nro 31.

    4. Kemikaalien suurimmat sallitut pitoisuudet (MPC): GN 2.1.7.2041-06. -- [Esitetty 2006-02-07]. - M.: Standartinform, 2006. - 7 s.

    5. Tsimbalyuk K. K. Polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen (PAH) määrittäminen ympäristön kohteissa (katsaus) / K. K. Tsimbalyuk, Yu. M. Denga, V. P. Antonovich // Kemiallisen analyysin menetelmät ja objektit. - 2013. - T. 8, nro 2. - S. 50 - 62.

    6. Yu. A. Zolotov, Fundamentals of Analytical Chemistry. Yleisiä kysymyksiä. Erotusmenetelmät: 2 kirjassa. / Yu. A. Zolotov, E. N. Dorokhova, V. I. Fadeeva ym. Toim. Yu.A. Zolotova. -- M.: Korkeampi. Shk., 2002. --. -- Prinssi. 1. - 2002. - 351 s.

    7. Tsarev N. I. Käytännön kaasukromatografia. Opetusapu kemian tiedekunnan opiskelijoille erityiskurssilla "Kaasukromatografiset analyysimenetelmät" / N.I. Tsarev, V.I. Tsarev, I.B. Katrakov. - Barnaul.: Altain osavaltion yliopiston kustantamo, 2000. - 156 s.

    8. Drugov Yu.S. Saastuneen ilman kaasukromatografinen analyysi / Yu.S. Drugov, A.A. Rodin. -- M.: BINOM. Knowledge Laboratory, 2015. -- 531 s.

    9. Styskin E. L. Käytännön korkean suorituskyvyn nestekromatografia / E. L. Styskin, L. B. Itsikson, E. V. Braude. -- M.: Chemistry, 1986. -- 210 s.

    10. Dmitrikov V. P., Larionov O. G., Nabivach V. M. Polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen analyysi korkean erotuskyvyn nestekromatografialla // Uspekhi khimii. - 1986. - T. 2, nro 4. - S. 679 -700.

    11. Juomavesi. Menetelmä bentso(a)pyreenipitoisuuden määrittämiseksi: GOST 31860 - 2012. -- [Otettu käyttöön 1.1.2014]. - M.: Standartinform, 2014. - 11 s. -- (valtioiden välinen standardi).

    12. Borsch N. A. Bentsapyreenin määritys korkean erotuskyvyn nestekromatografialla / N. A. Borsch, S. V. Sidorenko // Tieteen ja tekniikan kehityksen nykysuuntaukset. - 2016. - V. 1, nro 2. - S.37 - 41.

    13. Proskurina N. A. Moniytimien aromaattisten hiilivetyjen määrittäminen rasvaa sisältävissä elintarviketuotteissa kiinteäfaasiuutolla / N. A. Proskurina, V. A. Davankov, M. M. Ilyin // Sorptio- ja kromatografiset prosessit. - 2009. - T. 9, nro 2. - S. 167 - 176.

    14. Nazarkina S. G. Nazarkina S. G., Purygin P. P., Bulanova A. V., Larionov O. G. Kapillaarikaasukromatografia sulaveden ekologisessa hallinnassa // Vestnik SamGU. - 2000. - T. 2, . -- S. 152-156.

    Isännöi Allbest.ru:ssa

    ...

    Samanlaisia ​​asiakirjoja

      Aromaattiset hiilivedyt: yleiset ominaisuudet. Aromaattisten hiilivetyjen nimikkeistö ja isomeria, fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet. Elektrofiilisen ja nukleofiilisen substituution reaktioiden mekanismi aromaattisessa sarjassa. Areeenien käyttö, niiden myrkyllisyys.

      tiivistelmä, lisätty 11.12.2011

      Yleistä vinyylikloridista - väritön kaasu, vahva myrkky, jolla on mutageeninen, karsinogeeninen ja teratogeeninen vaikutus. Vinyylikloridin löytämisen historia, sen kemialliset ominaisuudet ja valmistusmenetelmät. Asetyleenin katalyyttinen kaasufaasihydroklooraus.

      esitys, lisätty 10.8.2015

      Aldehydien luokitus, rakenne, esiintyminen luonnossa, biologinen vaikutus, käyttö. Ketonien nimikkeistö, löytöhistoria, fysikaaliset ja kemialliset ominaisuudet. Nukleofiilisen lisäyksen reaktiot. Kemialliset menetelmät aldehydien tunnistamiseen.

      esitys, lisätty 13.5.2014

      Veden ominaisuudet ja pehmennysmenetelmät. Vaatimukset kulutetun veden kovuudelle lämmön ja sähkön tuotannossa. Teoreettiset perusteet ja menetelmät veden kovuuden määrittämiseksi kompleksometrisellä menetelmällä. Näytteenotto, reagenssit, määritys.

      lukukausityö, lisätty 10.7.2009

      Fenolien käsite ja nimikkeistö, niiden fysikaaliset ja kemialliset perusominaisuudet, tunnusomaiset reaktiot. Menetelmät fenolien saamiseksi ja niiden käytännön soveltaminen. Fenolin myrkylliset ominaisuudet ja sen negatiivisen vaikutuksen luonne ihmiskehoon.

      lukukausityö, lisätty 16.3.2011

      Aspartaamin löytämisen historia, sen ominaisuudet. Aspartaamin määritysmenetelmä, laitteet, instrumentit ja reagenssit. Aspartaami ihmiskehossa. Aspartaamin toksikologiset ja kliiniset tutkimukset. Aminohappoa fenyylialaniinia sisältävien elintarvikkeiden nauttiminen.

      tiivistelmä, lisätty 04.10.2011

      Fenolin ja formaldehydin myrkyllinen vaikutus eläviin organismeihin, menetelmät niiden kvalitatiiviseen määrittämiseen. Fenolin kvantitatiivinen määritys luonnonvesinäytteistä. Menetelmä orgaanisten myrkyllisten aineiden pienimpien havaitsemispitoisuuksien määrittämiseksi vedessä.

      lukukausityö, lisätty 20.5.2013

      C-vitamiinin kemiallinen rakenne, ominaisuudet ja biologinen merkitys. Päivittäinen tarve. Kokeellinen jodometrinen määritys, kvantitatiiviset ja kemialliset menetelmät elintarvikkeiden ja vitamiinivalmisteiden vitamiinipitoisuuden analysointiin.

      lukukausityö, lisätty 18.3.2013

      Aromaattisten asetaminojohdannaisten yleiset ominaisuudet ja tärkeimmät kemialliset ominaisuudet. Menetelmät aromaattisten asetaminojohdannaisten aitouden määrittämiseksi. Asetaminojohdannaisten käyttö farmakologiassa ja niiden vaikutus ihmiskehoon.

      lukukausityö, lisätty 11.11.2009

      Yhteisiä piirteitä yksi- ja moniarvoisten alkoholien molekyylien rakenteessa. etyylialkoholin ominaisuudet. Alkoholin vaikutus ihmiskehoon. Vastaavuuden määrittäminen lähtöaineiden ja reaktiotuotteiden välille. Moniarvoisten alkoholien kemialliset ominaisuudet.


    Sivu 1



    sivu 2



    sivu 3



    sivu 4



    sivu 5



    sivu 6



    sivu 7



    sivu 8



    sivu 9



    sivu 10



    sivu 11



    sivu 12



    sivu 13



    sivu 14



    sivu 15



    sivu 16



    sivu 17



    sivu 18



    sivu 19

    GOST 24104.

    Pyörivä haihdutin IR-1M.

    GOST 25336.

    Kylpyvesi.

    Magneettisekoitin tyyppi MM-ZM sähkölämmityksellä.

    Kromatoskooppi ultraviolettivalaisin, jonka spektrialue on 250 - 700 nm ja BUV-15-lamppu UV-säteilyn lähteenä.

    Kromatografinen lasikammio 40 x 40 x 40 cm.

    Lasilevyt ohutkerroskromatografiaan 5 x 20 ja 20 x 20 cm.

    Lasikromatografiakolonni, jonka pituus on 500 mm ja halkaisija 20 mm, jonka pää on vedetty pohjaan ja säiliö, jonka tilavuus on 50 - 60 cm 3 ПШ 14/23.

    Jääkaappi ХПТ-2-400-29/32 ХС tai ХШ-1-400-29/32 ХС GOST 25336:n mukaan.

    Tyyppi AIO-14/23-50 TS tai AIO-14/23-14/23-65 TS GOST 25336:n mukaan.

    Mittaviivain, jonka asteikkojako on 0,1 cm GOST 427:n mukaan.

    Deflegmaattori 250-19 / 26-29 / 32 TS tai 300-19 / 26-29 / 32 GOST 25336:n mukaan.

    Suutin P-1-19/26-14/23-14/23 TC tai H-2-19/26-14/23 TC GOST 25336:n mukaisesti.

    GOST 25336.

    GOST 25336. Mittosylinterit 1-100, 1-250 tai 3-100, 3-250 GOST 25336:n mukaan.

    Kemiallinen lasi V-1-100 tai V-1-150 GOST 25336:n mukaan.

    Pullot K-1-100-29/32 THS, K-1-25R-29/32 THS, K-1-500-29/32 THS tai P-1-500-29/32 THS standardin GOST 25336 mukaisesti.

    Buechner-suppilo 1 tai 2 tai 3 GOST 9147:n mukaan.

    Punnituskupit (pullopussit) SV-14/8 tai SV-19/9 tai SV-24/10 tai SV-34/12 GOST 25336 mukaan.

    MSH-10-tyyppiset mikroruiskut, lasikapillaarit.

    Yleisin paperin ilmaisin.

    Laboratoriosuodatinpaperi standardin GOST 12026 mukaan.

    Veitsellä tai ohuella lastalla.

    Puhdistettu etyylialkoholi standardin GOST R 51652 mukaan tai tekninen puhdistettu etyylialkoholi standardin GOST 18300 mukaan.

    Asetonitriili normatiivisen asiakirjan mukaan.

    Selluloosa mikrokiteinen jauhe normatiivisen asiakirjan mukaisesti.

    GOST R 51650-2000

    Benz (v) kryseeni, pääaineen pitoisuus on vähintään 98 %.

    Sephadex LH-20.

    ASKG-tuotemerkin silikageeli normatiivisen asiakirjan mukaan.

    On sallittua käyttää muita mittauslaitteita, joilla on metrologiset ominaisuudet ja laitteita, joilla on tekniset ominaisuudet, sekä reagensseja ja materiaaleja, joiden laatu on vähintään edellä mainittu.

    5.2 Kokeen valmistelu

    5.2.1 Liuottimien valmistus

    Liuottimet (n.heksaani, etyylialkoholi, asetoni, bentseeni) tislataan tavalliseen tapaan palautusjäähdyttimellä.

    Dimetyyliformamidi tislataan lisäämällä 120 cm 3 bentseeniä ja 36 cm 3 vettä 1 dm 3 liuotinta kohti tislauskolviin.

    5.2.2 Selluloosaasetaatin valmistus

    (50,0 ± 2,0) g mikrokiteistä selluloosaa laitetaan 500 cm 3:n tasapohjaiseen pulloon, valmistetaan seos, jossa on 150 cm 3 bentseeniä tai tolueenia, 70 cm 3 etikkahappoanhydridiä ja 0,3 cm 3 rikkihappoa. erillisessä pullossa. Reaktioseosta sekoitetaan magneettisekoittimella 6 - 8 h, jätetään sekoittamatta vielä 18 h, minkä jälkeen nestefaasi dekantoidaan ja jäännös kaadetaan 300 cm 3 etyylialkoholiin, sekoitetaan, jätetään sekaan alkoholiin. 24 h, sitten selluloosa suodatetaan pois Buchner-suppilolla, pestään 100 cm3:llä etyylialkoholia ja tislatulla vedellä, kunnes pesuvedet ovat neutraaleja (indikaattoripaperin mukaan).

    Tarkista sitten asetyloidun selluloosan kromatografinen aktiivisuus. Valmistele tätä varten 3-4 tuntia ennen analyysiä etyylialkoholin, asetonin ja veden seos tilavuussuhteessa 60:25:15 ja kaada se kromatografiseen kammioon, joka on vuorattu suodatinpaperinauhoilla. Liuotinkerroksen korkeuden tulee olla 1,5–2 cm kapillaari 5 μl:n pisteeseen bents(a)-pyreeniliuosta, jonka massapitoisuus on 1 μg / cm 3. Levy asetetaan kromatografiseen kammioon ja jätetään kammioon, kunnes liuotintaso nousee vähintään 100 mm aloitusviivasta. Kromatografian lopussa levy poistetaan, kuivataan ilmassa ja ultraviolettisäteilyttimen lampun alla havaitaan fluoresoiva sininen bentso(a)pyreenitäplä. Mittaa etäisyys lähtöviivasta liuotinrintamaan ja bentso(a)pyreenipisteen keskelle; laske Rj:n arvo, joka arvioi bentso(a)pyreenin liikenopeuden levyllä, kaavan mukaan:

    missä XBP on etäisyys lähtöviivasta bentso(a)pyreenipisteen keskikohtaan, mm;

    L on etäisyys lähtöviivasta liuotinrintamaan, mm.

    Bentso(a)pyreenin Rj-arvon tulisi olla 0,1.

    Työlevyn valmistamiseksi 5 g asetyloitua selluloosaa suspendoidaan 20 cm 3:een etyylialkoholia ja kaadetaan tasaisena kerroksena 20 x 20 cm:n levylle.

    5.2.3 Bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin standardiliuosten valmistus

    (10,0+0,2) mg bentso(a)pyreeniä ja bentso(b)kryseeniä punnitaan punnituskuppeihin (pullopusseihin). Näytteet siirretään kvantitatiivisesti mittapulloihin, joiden tilavuus on 100 cm 3: bents(a)pyreeni-bentseeni, bentso(c)kryseeni-asetonitriili, jonka jälkeen bents(a)pyreeniliuoksen tilavuus säädetään merkkiin bentseenillä, liuoksen tilavuus on bents(c)kryseeni-asetonitriili. Saatujen liuosten massapitoisuus on 100 μg/cm 3 . Liuoksia säilytetään kylmässä pimeässä paikassa enintään kolme kuukautta.

    5.2.4 Bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin työliuosten valmistus

    Työliuokset valmistetaan laimentamalla standardiliuoksia 1, 5 ja 10 cm 3:n pipeteillä ja 100 cm 3:n mittapulloilla, liuoksen tilavuus säädetään merkkiin sopivalla liuottimella, sekoitetaan ja varastoidaan. kylmässä pimeässä paikassa enintään kuukauden ajan.

    Bentso(a)pyreeniliuoksen valmistus, jonka massapitoisuus on 1,0 μg/cm 3 (määritetään spektrofluorimetrisesti): 1,0 cm 3 otetaan standardiliuoksesta ja siirretään mittapulloon, jonka tilavuus on 100 cm 3 ; Liuoksen tilavuus säädettiin merkkiin bentseenillä.

    Bents(a)pyreeniliuoksen valmistus, jonka massapitoisuus on 0,25:1,0 ja 5,0 μg/cm 3 (määritetään korkean erotuskyvyn nestekromatografialla): 0,25 otetaan standardiliuoksesta; 1,0; 5,0 cm3, vastaavasti, ja siirretään mittapulloihin, joiden tilavuus on 100 cm3; liuosten tilavuus säädettiin merkkiin asetonitriilillä.

    Bentso(b)kryseenin liuosten, joiden massapitoisuus on 0,5 ja 10 μg/cm 3, valmistus: standardiliuoksesta otetaan vastaavasti 0,5 ja 10 cm 3 ja siirretään mittapulloihin, joiden tilavuus on 100 cm 3; Kunkin liuoksen tilavuus täytettiin merkkiin asetonitriilillä.

    5.2.5 Kalibrointiliuosten valmistus

    Bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin seoksen kalibrointiliuosten valmistamiseksi bentso(a)pyreenin standardiliuoksen tilavuudet, jonka massapitoisuus on 100 μg/cm 3 ja bentso(b) työliuosta )kryseenin massapitoisuus 10 μg/cm 3 , lisää tilavuus merkkiin asetonitriilillä. Tuloksena olevat liuokset sekoitetaan ja säilytetään pimeässä, kylmässä paikassa enintään yhden kuukauden ajan.

    taulukko 2

    ratkaisu

    Alkuliuoksen tilavuus, cm 3

    Kalibrointiliuoksen massapitoisuus, µg/cm 3

    Benz (a) pyreenin massapitoisuus 100 μg / cm3

    Benz (v) kryseenimassapitoisuus 10 μg / cm3

    Bents(a)pyreeni

    Benz(v)kryseeni

    5.3 Testin suorittaminen

    5.3.1 Bentso(a)pyreenin erottaminen tuotteesta

    Pyöreäpohjaiseen tai tasapohjaiseen pulloon, jonka tilavuus on 100 cm 3, laitetaan 10 g:n painoinen näyte tuotteesta, liuos, joka sisältää 4 g kaliumhydroksidia 50 cm 3:ssä 92-prosenttista etyylialkoholia. lisätty. Pullon sisältö sekoitetaan ravistamalla. Pullo liitetään palautusjäähdyttimeen ja kuumennetaan vesihauteessa tai magneettisekoittimella reaktioseoksen kiehuessa 3 h. Sitten pulloon lisätään jääkaapin läpi 100 cm 3 tislattua vettä. Reaktiomassa jäähdytetään huoneenlämpötilaan. Jäähdytyksen jälkeen reaktiomassa siirretään erotussuppiloon, jonka tilavuus on 500 cm3. Jos reaktiomassaan jää hydrolyysin jälkeen kiinteää jäännöstä, se erotetaan Buchner-suppilolla ja pestään jäännös suodattimella 30 cm3:lla kuumaa etyylialkoholia. Reaktiomassan nestefaasia käytetään uuttamiseen. Lisää erotussuppiloon 30 cm3 n.heksaania. Suppilon sisältöä ravistellaan ja jätetään erottelemaan nesteitä. Emulsion muodostuksessa seokseen lisätään erotussuppilossa 20 cm3 etyylialkoholia. Erottamisen jälkeen alempi vesi-alkoholifaasi kaadetaan pulloon ja heksaaniuute kaadetaan toiseen erotussuppiloon. Tämä reaktiomassan käsittely suoritetaan vielä kaksi kertaa käyttämällä uuttamiseen 30 cm3 n-heksaania ja etyylialkoholia emulsion erottamiseksi 20 cm3:n erissä.

    Uuton päätyttyä yhdistetty heksaaniuute pestään erotussuppilossa tislatulla vedellä kolme kertaa 30 cm 3 :ssä, uute siirretään pyöreäpohjaiseen pulloon, jonka tilavuus on 100 cm 3 suodattaen vedettömän kerroksen läpi. natriumsulfaattia suppilossa, jossa on huokoinen suodatin. Liuos haihdutetaan pyöröhaihduttimessa 50 cm3:n tilavuuteen vesihauteen lämpötilassa, joka ei ylitä 60 °C.

    Yksi irrotettu uute siirretään 500 cm3:n erotussuppiloon ja lisätään siihen 50 cm3 dimetyyliformamidin ja veden seosta tilavuussuhteessa 9:1. Seosta ravistellaan voimakkaasti 1 minuutin ajan, faasien erotuksen jälkeen alempi kaadetaan tasapohjaiseen 200 cm 3 -kolviin ja 50 cm 3 dimetyyliformamidin ja veden seosta uutetaan jälleen ylemmästä heksaanista. kerros. Heksaanikerros heitetään pois, tasapohjaisessa pullossa yhdistetty dimetyyliformamidiuute siirretään erotussuppiloon, lisätään 100 cm3 tislattua vettä ja uutetaan vesifaasista heksaanilla kolme kertaa 50 cm3:lla. Vesifaasi heitetään pois ja heksaaniuute pestään vedellä kolme kertaa 30 cm3, siirretään tasapohjaiseen pulloon, lisätään 10 g vedetöntä natriumsulfaattia ja inkuboidaan tunnin ajan, n.heksaani haihdutetaan pyörölaitteella. haihduttimella 1,5 - 2,0 cm3:n tilavuuteen, jäljelle jäänyt liuotin poistetaan

    GOST R 51650-2000

    ilmavirtaus vesisuihkupumppuun yhdistetyn tyhjiön läpi, pullossa oleva jäännös liuotetaan 0,5 cm 3:een etyylialkoholia.

    Punnitaan (2,5 ± 0,2) g Sephadex LH-20:tä 100 cm 3:n lasiin, lisätään 20 cm 3 etyylialkoholia ja annetaan turvota 3-4 tuntia. määrä alkoholia lasikromatografiseen pylvääseen, annetaan liuottimen valua pois siten, että alkoholikerros sorbenttikerroksen yläpuolelle jää vähintään 2 mm. Loput pullosta saadusta uutteesta levitetään valmistettuun pylvääseen pipetillä ja pestään se pois pullosta kolme kertaa etyylialkoholilla 0,5 cm3:n erissä. Eluointi polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen pylväästä, mukaan lukien bentso(a)pyreeni, suoritetaan 40 cm3:llä etanolia, ensimmäinen 12 cm3:n fraktio heitetään pois, toinen 25 cm3:n fraktio kerätään. Liuottimen eluointinopeus 0,5 cm3/min saavutetaan kohdistamalla lievä ylipaine ilma- tai typpivirralla puhaltimeen tai kaasupulloon yhdistetyn suuttimen läpi. Kaasu tulee syöttää silikageelillä täytetyn lasiputken kautta.

    Sephadex LH-20 -kolonnia voidaan käyttää toistuvasti. Tätä varten pylväs pestään 25 cm 3:llä etyylialkoholia, jotta sorbentti ei kuivu fraktioinnin jälkeen ja laitetaan seuraava näyte.

    Toisen fraktion liuos siirretään päärynänmuotoiseen pulloon, jonka tilavuus on 50 cm 3, liuotin haihdutetaan tilavuuteen 0,5 - 1,0 cm 3, sen jäännös poistetaan ilma- tai typpivirrassa.

    Saatu bentso(a)pyreeniä sisältävä fraktio analysoidaan edelleen korkean erotuskyvyn nestekromatografialla tai spektrofluorimetrisellä menetelmällä.

    Samanaikaisesti suoritetaan kontrollikoe, jossa kaikki analyysin vaiheet suoritetaan käyttäen reagensseja menettelyn mukaisesti, mutta ilman tuotteen punnitsemista.

    5.3.2 Bents(a)pyreenin määritys korkean erotuskyvyn nestekromatografialla

    5.3.2.1 Kromatografiaolosuhteet

    Kromatografiaolosuhteet valitaan käytetyn nestekromatografin ja kromatografiakolonnin tyypin mukaan.

    Esimerkkinä voidaan antaa seuraavat olosuhteet bentso(a)pyreenin kromatografiselle määritykselle.

    Nestekromatografi AIex-334 fluoresenssidetektorilla Kratos FS-970.

    Supelcosil LC-PAM -kolonni, rakeistus 5 mikronia, pituus 150 mm, halkaisija - 4,6 mm.

    Fluorometrinen detektori: viritysaallonpituus 300 nm, emissiosuodatin - 418 nm.

    Liikkuva faasi: asetonitriili ja vesi tilavuussuhteessa 8:2.

    Eluointinopeus - 2,0 cm3/min.

    Injektoidun näytteen tilavuus on 20 µl.

    Vahvistimen herkkyys valitaan siten, että bentso (a) pyreenin ja sisäisen standardin - bentso (b) kryseenin signaalien intensiteetti ei ylitä 95% asteikosta.

    Analyysiaika - 15 min; bentso(a)pyreenin retentioaika - 5 min, bentso(b)kryseenin -13 min.

    Analysoidut liuokset kromatografoidaan kahdesti samoissa olosuhteissa. Huippujen pinta-alat mitataan integraattorilla tai manuaalisesti huipun korkeuden ja sen leveyden tulona puolikorkeudella.

    Bentso(a)pyreenipitoisuus määritetään sisäisen standardin menetelmällä tai lisäysmenetelmällä.

    5.3.2.2 Bentso(a)pyreenipitoisuuden määritys liuoksesta (uutteesta), joka on saatu 5.3.1 kohdan mukaisesti sisäisen standardin menetelmällä

    Tätä kvantitatiivista arviointimenetelmää käytettäessä kromatografi kalibroidaan alustavasti käyttämällä kalibrointiliuoksia, jotka on valmistettu kohdan 5.2.5 mukaisesti.

    Kirjataan kolme kromatogrammia jokaisesta valmistetusta liuoksesta ja mitataan bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin piikkien pinta-alat kohdassa 5.3.2.1 määritellyissä olosuhteissa. Määritä bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin piikkien pinta-alan aritmeettinen keskiarvo laskettuna kolmesta kromatogrammista.

    Kalibrointikerroin K lasketaan kaavalla

    missä ja ja 2 ovat bentso (a) pyreenin (/l]) ja bentso (b) kryseenin (t 2) massat, μg, joka on lisätty kromatografiin; 5) ja ^2 - bents(a)pyreenin (.9]) ja bentso(b)kryseenin (A^) piikkien pinta-alat, cm3.

    Kalibrointikerroin K lasketaan kullekin liuokselle.

    Sen arvot eivät saisi poiketa kaikkien tulosten kalibrointikertoimen aritmeettisesta keskiarvosta enempää kuin 10%.

    Kun viritysaallonpituus on 300 nm ja emissiosuodatin 418 nm, kalibrointikertoimen arvo on 9,5.

    Ennen analyysin aloittamista näytteiden valmistusvaiheessa alkalista hydrolyysiä varten tuotenäytteeseen ja kontrollikokeen näytteeseen lisätään 50 μl bentso(b)kryseeniliuosta, jonka massapitoisuus on 0,5 μg/cm 3 . . Molemmat näytteet käyvät läpi kaikki kohdassa 5.3.1 määritellyt testivaiheet. Kuiva jäännös liuotetaan 200 ul:aan asetonitriiliä.

    Kirjaa kohdassa 5.3.2.1 määritellyissä olosuhteissa kromatogrammit bentsopyreeniliuoksesta, jonka massapitoisuus on 100 μg / cm 3 , ja bentsokryseeniliuoksesta, jonka massapitoisuus on 100 μg / cm 3 . , huomioi bentsin (a) pyreenin ja bentsin (c) krysenan vapautumisaika. Sitten kirjataan vertailunäytteen kromatogrammit, jossa on lisätty bentso(b)kryseeniä, ja tuotenäytteestä, jossa on sama lisäys bentso(b)kryseeniä. Mittaa bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin piikkien pinta-alat tuotenäytteen ja kontrollinäytteen kromatogrammeista.

    Jokaisesta näytteestä kirjataan kaksi kromatogrammia. Kahdesta kromatogrammista lasketaan bentso(a)pyreenin ja bentso(b)kryseenin piikkien pinta-alan aritmeettinen keskiarvo.

    Saatujen tietojen perusteella määritetään bentso(a)pyreenin massa, mcg, tuotenäytteestä m\ ja vertailukokeen näytteestä m 2 .







    "72 on bentso(a)pyreenin massa kontrollikokeen näytteessä, mcg; t st on tuotenäytteeseen ja kontrollinäytteeseen lisätyn bentso(v)kryseenin massa, mcg;

    S"] ja S 2 - bentso(a)pyreenin piikkien pinta-alat tuotenäytteen (.S"]) ja kontrollinäytteen (.S/) kromatogrammeissa, cm2;

    L/, L/ - bents(b)kryseenin piikkien pinta-alat tuotenäytteen (.SS) ja kontrollinäytteen (L/) kromatogrammeissa, cm 2 ;

    K on 5.3.2.2 kohdan mukaisesti määritetty kalibrointikerroin.

    5.3.2.3 Bentso(a)pyreenipitoisuuden määritys liuoksesta (uutteesta), joka on saatu 5.3.1 kohdan mukaisesti lisäysmenetelmällä

    Kvantifiointia varten lisäysmenetelmää käytettäessä vertailukokeen näyte analysoidaan samanaikaisesti tuotenäytteen kanssa. Tuotenäytteistä eristetyt fraktiot ja kohdan 5.3.1 mukainen kontrolliajo liuotetaan 400 µl:aan asetonitriiliä. Tuloksena saadut liuokset jaetaan kahteen osaan ja otetaan pienempi osa (40 µl) koeputkeen tai päärynänmuotoiseen pulloon.

    Kirjataan tuotenäytteiden, kontrollinäytteiden kromatogrammit ja bentso(a)pyreeniliuoksen kromatogrammi, jonka massapitoisuus on 0,25 μg/cm 3 . Huomaa bentso(a)pyreenin vapautumisaika.

    Lisää tuotenäytteen ja kontrollikokemuksen (360 μl) muihin osiin 10 - 20 μl liuosta, jossa bentso(a)pyreenin massapitoisuus on 5 μg/cm 3 . Saadut liuokset syötetään uudelleen kromatografiin.

    Kaikki kromatogrammit tallennetaan kahtena kappaleena. Bentso(a)pyreenin piikkien pinta-alat mitataan. Kahden kromatogrammin perusteella lasketaan bentso(a)pyreenin piikin pinta-alan aritmeettinen keskiarvo.

    Saatujen tietojen perusteella määritetään bentso(a)pyreenin massa, μg, tuotenäytteestä /77] ja kontrollikokeen näytteestä t 2:

    t op ■ S 1 . _ t - ■ S 3 (9)

    S 2 - 0,95) ' 2 5 4 - 0,95 3'


    jossa /77 op ja /77 k on bentso(a)pyreenin massa, joka on lisätty osaan tuotenäytteestä (t op) ja kontrollinäytteestä (/%) saatua uuttetta, μg;

    S"] ja S 2 - bentso(a)pyreenin piikkien pinta-alat tuotenäytteen (.S"]) ja tuotenäytteen kromatogrammeissa, joissa on lisätty bentso(a)pyreeni (L/), cm 2;

    L/ ja.S) - bentso(a)pyreenin piikkien pinta-alat kontrollikokeen näytteen (L/) ja vertailukokeen näytteen kromatogrammeissa, jossa on lisätty bentso(a)pyreeniä (L/), cm2;

    0,9 on se osuus näytteestä, johon on lisätty bents(a)pyreeniä.



    5.3.3 Bents(a)pyreenipitoisuuden määritys spektrofluorimetrisesti huoneenlämpötilassa

    Määritettäessä bentso(a)pyreenipitoisuutta spektrofluorimetrillä, analysoidaan samanaikaisesti tuotenäytteen kanssa vertailukokeen näyte, johon lisätään 50 μl bentso(a)pyreeniliuosta, jonka massapitoisuus on 1 μg. /cm 3 lisätään.

    Tuotenäytteestä ja lisäainetta sisältävästä kontrollinäytteestä kohdan 5.3.1 mukaisesti saadut bentso(a)pyreeniä sisältävät fraktiot liuotetaan 0,5 cm 3:een bentseeniä ja puhdistetaan sitten ohuessa asetyloidussa selluloosakerroksessa.

    Tätä varten 20 x 20 cm:n levy, joka on valmistettu kohdan 5.2.2 mukaisesti, jaetaan kahteen kenttään: 1,5–2 cm leveään sivukenttään ja pääkenttään, jossa sorbenttikerroksen päälle piirretään jakokaistale skalpellilla tai ohut lasta. Kohdan 5.3.1 mukaisesti eristetyn fraktion liuos levitetään pääkenttään yhtenäisellä kaistaleella 2 cm etäisyydellä levyn alareunasta ja 1 cm sivureunoista. Liuos levitetään ohuesti vedetyllä kapillaarilla tai mikroruiskulla, pisteiden koko ei saa ylittää 5 mm. Aineen kvantitatiivista siirtoa varten se pestään kahdesti pois pullon seinämistä pienellä määrällä bentseeniä (0,4 - 0,6 cm 3). Sivukentän aloitusviivalla pisteeseen lisätään 5 μl bentso(a)pyreeniliuosta, jonka massapitoisuus on 1 μg/cm 3. Liuottimen täydellisen haihtumisen jälkeen levy asetetaan esikyllästettyyn kromatografiakammioon 70° - 85° kulmassa ja eluointi suoritetaan etyylialkoholin, asetonin ja veden seoksessa suhteessa 60: 25:15. Kun liuotinrintama saavuttaa 2 cm:n etäisyydelle levyn yläreunasta, se poistetaan kammiosta, kuivataan ilmassa ja bentso(a)pyreenikromatografinen vyöhyke kehitetään ultraviolettisäteilytyslampun alla. Pääkentän bents(a)pyreenivyöhykkeen sorbentti kaavitaan pois levyltä skalpellilla tai ohuella lastalla ja siirretään lasisuodattimelle, josta aine eluoidaan useassa vaiheessa 50 cm 3:llä bentseeniä pulloihin. tilavuudella 100 cm 3, sitten liuotin haihdutetaan pieneen tilavuuteen, loput liuotin poistetaan ilmavirralla ja 1 cm 3 bentseeniä lisätään pulloon.

    Spektrofluorimetrillä jännittävän valon aallonpituudella 386 nm alueella 400 - 440 nm pyyhkäisynopeudella 60 nm/min tuotenäytteen ja vertailunäytteen fluoresenssispektrit, johon on lisätty bentso(a)pyreeniä tallennetaan.

    Liuosten spektrit tallennetaan yhdellä vahvistusmoodilla säätämällä aukkoa ja vahvistuskerrointa kontrollinäyteliuoksen mukaan siten, että bentso(a)pyreenin signaali aallonpituudella 406 nm on 0,4 - 0,6 instrumentin asteikosta. Jokaisen liuoksen spektri tallennetaan kahdesti, jolloin saavutetaan hyvä toistettavuus. Saatuilla spektrogrammeilla enintään aallonpituudella 406 nm mitataan tuotenäytteen ja kontrollinäytteen bentso(a)pyreenin spektriviivan korkeus millimetreinä. Laske bentso(a)pyreenin korkeuksien keskiarvo kahden spektrogrammin mukaan. Kun tuotteessa on korkeita bentso(a)pyreenipitoisuuksia, näytteet laimennetaan bentseenillä ja spektri kirjataan uudelleen samassa vahvistustilassa kuin kontrollinäytteellä.

    Suorita kaksi rinnakkaista määritystä.

    5.4 Tulosten käsittely

    5.4.1 Bents(a)pyreenin massaosuus tuotteessa X \,% tai X 2, mg / kg, kun käytetään korkean erotuskyvyn nestekromatografiamenetelmää, lasketaan kaavoilla:


    (t 1 - t 2) ■ 100 (t g - t 2) t ■ 1000 1000 "t 10






    missä mi on bentso(a)pyreenin massa tuotenäytteessä, μg;

    m2 on bentso(a)pyreenin massa kontrollinäytteessä, μg; t on analyysiin otetun tuotteen massa, g.

    5.4.2 Bents(a)pyreenin massaosuus tuotteessa A), % tai X 2 , mg/kg spektrofluorimetrimenetelmää käytettäessä lasketaan seuraavilla kaavoilla:



    S st NU- 100 s ST // V t ■ 1000 ■ 1000 ■






    missä cst on bentso(a)pyreenin massapitoisuus työliuoksessa, joka on valmistettu 5.2.4 mukaisesti ja joka on lisätty kontrollinäytteeseen, μg/cm 3 ;

    bentso(a)pyreenin spektriviivan korkeus tuotenäytteen spektrogrammissa, mm; bentso(a)pyreenin spektriviivan korkeus kontrollikokeen näytteen spektrogrammissa, mm;

    V on vertailukokeen näytteeseen lisätyn bents(a)pyreenin työliuoksen tilavuus, cm 3; t on testattavaksi otetusta tuotteesta otetun näytteen paino, g.

    Lopullinen testitulos on kahden rinnakkaisen määrityksen aritmeettinen keskiarvo, joissa on sama määrä merkitseviä numeroita.

    Jos rinnakkaismääritysten tulosten välinen ero ei ole suurempi kuin \X-y - YY 2 |<

    < 0,01 dX, где, Х 2 и X- результаты параллельных определений и их среднее арифметическое, а d - норматив контроля сходимости, то среднее арифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива d приведено в таблице 3.

    Analyysin X tuloksen ja taulukossa 3 olevan suhteellisen virheen d arvon mukaan laske absoluuttinen virhe A = 0, (SH

    Analyysin tulos esitetään muodossa (X ± A), mg/kg tai %, kun P = 0,95.

    5.5 Analyysitulosten tarkkuuden valvonta

    5.5.1 Toistettujen määritysten toistettavuus tarkastetaan jokaisen 5.3 kohdan mukaisesti analysoidun näytteen osalta.

    5.5.2 Työnäytteitä käytetään toistettavuuden valvomiseen. Näyte jaetaan kahteen yhtä suureen osaan ja analysoidaan metodologian mukaisesti eri laboratorioissa tai samassa laboratoriossa vaihtelemalla analyysiolosuhteita mahdollisimman paljon, eli eri tilavuusvälinesarjoilla analyysit suoritetaan eri päivinä tai kahdella. eri analyytikot.

    Kontrollianalyysien toistettavuuden katsotaan olevan tyydyttävä, jos \ X-y - X 2 \<

    < 0,01 DX, где Л), Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднее арифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 3.

    Toistettavuuden valvonnan tiheys - vähintään kerran kahdessa viikossa

    Taulukko 3 - Mittausalue, suhteellisen virheen ominaisuuden arvo ja suhteellisen virheen satunnaiskomponentin (konvergenssi ja toistettavuus) toiminnallisen ohjauksen standardit luotettavuustasolla P = 0,95

    5.5.3 Tarkkuuden säätämiseksi käytä työnäytteitä, joihin on lisätty bentso(a)pyreeniä. Näyte jaetaan kahteen yhtä suureen osaan, joista ensimmäinen analysoidaan menettelyn mukaisesti, ja toiseen lisätään tunnettu bentso(a)pyreenilisäys ja analysoidaan sitten myös menettelyn mukaisesti. Lisäaineen arvon tulee olla 50 - 150 % analysoitavan näytteen bentsapyreenipitoisuudesta.

    Kontrollianalyysien tarkkuuden katsotaan olevan tyydyttävä, jos |L) - X- s \< К, где Л), X и с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена соответственно; К - норматив оперативного контроля точности.

    Tietokoneella kirjoitettu FSUE "STANDARTINFORM".

    Painettu FSUE-haara "STANDARTINFORM" - tyyppi. "Moskovan tulostin", 105062 Moskova, Lyalin per., 6

    GOST R 51650-2000

    1 käyttöalue................................................ .......... 1

    3 Näytteenotto ................................................... .............................. 2

    4 Matalan lämpötilan spektrofluorimetria ................................................ 2

    4.1 Laitteet, materiaalit ja reagenssit................................................ ... 2

    4.2 Testiin valmistautuminen................................................ ...................... 3

    4.3 Testin suorittaminen ................................................ ........................ 3

    4.4 Tulosten käsittely................................................ ...................... 6

    4.5 Analyysitulosten tarkkuuden tarkistaminen................................................... ..... 6

    5 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia- ja spektrofluorimetrimenetelmät

    huonelämpötila ................................................ ................................ 7

    5.1 Laitteet, materiaalit ja reagenssit................................................ ... 8

    5.2 Testiin valmistautuminen................................................ .............................. 9

    5.3 Testin suorittaminen ................................................... .............. ....10

    5.4 Tulosten käsittely................................................ ................................13

    5.5 Analyysitulosten tarkkuuden tarkistaminen................................................... .................14

    6 Turvallisuusvaatimukset ................................................... ................ 15

    7 Kuljettajan pätevyysvaatimukset................................................... .15

    Liite A Bibliografia

    VENÄJÄN FEDERAATIOIN VALTIONSTANDARDI

    ELINTARVIKETUOTTEET Menetelmät bentso(a)pyreenin massaosuuden määrittämiseksi

    Kokonaismassan bents(a)pyreenifraktion määritysmenetelmät

    Esittelypäivä 2001-07-01

    1 käyttöalue

    Tämä kansainvälinen standardi koskee elintarvikkeiden raaka-aineita, elintarvikkeita, elintarvikkeita ja aromiaineita, ja siinä määritellään menetelmät bentso(a)pyreenin massaosuuden määrittämiseksi käyttämällä spektrofluorimetriaa matalassa ja huoneenlämpötilassa sekä korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa.

    Yleiskäyttöiset 2. tarkkuusluokan laboratoriovaa'at, joiden korkein punnitusraja 500 g GOST 24104:n mukaan.

    Pyörivä haihdutin IR-1M.

    Kylpyvesi.

    Kotitalouksien sähköliesi suljetulla spiraalilla ja lämmityssäätimellä GOST 14919:n mukaisesti.

    Dewar-astia minkä tahansa tilavuuden nestemäiselle typelle

    Kylpyammeet kromatografiaa varten (emaloidut fotokyvetit).

    Lasilevyt kooltaan 15 x 30 ja 20 x 40 cm.

    Pullot K-1-250-29/32 THS, K-1-100-29/32 THS, K-1-500-29/32 THS tai P-1-500-29/32 THS standardin GOST 25336 mukaisesti.

    Jääkaapit KHIT-1-300-14/23 XC tai KHIT-1-400-14/23 XC GOST 25336:n mukaan.

    Jääkaapit KhPT-2-400-29/32 KhS ja KhPT-1-300-29/32 tai KhPT-400-29/32 KhS GOST 25336:n mukaisesti.

    Deflegmaattori 250-19/26-29/32 TS tai deflegmaattori 300-19/26-29/32 TS GOST 25336:n mukaan.

    Lasiset koeputket P2-10-180 XC GOST 25336:n mukaan.

    Suutin P-1-19 / 26-14 / 23 TC tai H2-19 / 23 GOST 25336:n mukaan.

    Vesisuihkulaboratoriopumppu GOST 25336:n mukaan.

    Pipetit, joiden kapasiteetti on 1, 2, 5, 10 cm 3 GOST 29228 ja GOST 29229 mukaan.

    Suppilo VFO-32-POR 100-14/23 XC tai VFO-32-POR 160-14/23 XC GOST 25336:n mukaisesti.

    Mitatut koeputket P-2-15-14/23 XC GOST 1770:n mukaan.

    Erotussuppilo VD-1-500 tai VD-3-500 GOST 25336:n mukaan.

    Mittosylinterit 1-100, 1-250 tai 3-100, 3-250 GOST 25336:n mukaan.

    Punnituskupit (pullopussit) SV-14/8 tai SV-19/9 tai SV-24/10 tai SV-34/12 GOST 25336 mukaan.

    Lämpömittari lämpötilan mittausrajoilla 0-250 °С jakoarvolla 1 °С GOST 29224:n mukaan.

    Lasikapillaarit, lasitangot.

    n.oktaani, h., normatiivisen asiakirjan mukaan.

    n.heksaani, h., normatiivisen asiakirjan mukaan.

    Puhdistettu tekninen etyylialkoholi standardin GOST 18300 mukaisesti tai puhdistettu etyylialkoholi standardin GOST R 51652 mukaisesti.

    Petrolieetterifraktio 40 - 70 °C normatiivisen asiakirjan mukaan.

    Alumiinioksidi 2. aktiivisuusasteen kromatografiaan normatiivisen asiakirjan mukaisesti.

    Benz (a) pyreeni, pääaineen pitoisuus on vähintään 98 %.

    1,12-bentsperyleeni, pääaineen pitoisuus on vähintään 98%.

    On sallittua käyttää muita mittauslaitteita, joilla on metrologiset ominaisuudet, ja laitteita, joilla on tekniset ominaisuudet, sekä reagensseja ja materiaaleja, joiden laatu on vähintään ilmoitettu.

    4.2 Testiin valmistautuminen

    4.2.1 Liuottimien puhdistus

    Liuottimet (n. oktaani, etyylialkoholi, petrolieetteri, kloroformi ja n. heksaani) tislataan tavalliseen tapaan palautusjäähdyttimellä.

    4.2.2 Alumiinioksidin valmistus

    Alumiinioksidi kuivataan uunissa lämpötilassa (250 + 4) ° C 4 tuntia ja varastoidaan astiassa, jossa on jauhettu tulppa.

    4.2.3 Bents(a)pyreeniliuoksen valmistaminen ohutkerroskromatografiaa varten (todistajaliuos).

    Noin 10 mg bentso(a)pyreeniä punnitaan punnituspulloon, lisätään muutama millilitra petrolieetteriä, kunnes näyte on täysin liuennut.

    Saatu liuos siirretään kvantitatiivisesti 100 cm3:n mittapulloon ja liuoksen tilavuus säädetään merkkiin petrolieetterillä. Liuoksen säilyvyys jääkaapissa on enintään kolme kuukautta.

    4.2.4 Bents(a)pyreenistandardiliuoksen valmistaminen

    Punnitaan (10,0 ± 0,2) mg bentso(a)pyreeniä punnituspulloon, lisätään muutama millilitra n.oktaania, kunnes näyte on täysin liuennut. Saatu liuos siirrettiin kvantitatiivisesti hiotulla tulpalla varustettuun mittapulloon, jonka tilavuus oli 100 cm3, ja lisättiin merkkiin n.oktaanilla. Saadun liuoksen bentso(a)pyreenin massapitoisuus on 100 µg/cm3. Liuos säilytetään jääkaapissa. Liuoksen säilyvyysaika on enintään kolme kuukautta.

    4.2.5 Bentso(a)pyreenin työliuosten valmistus

    Bentso(a)pyreenin työliuokset massapitoisuus 0,1; 0,04 ja 0,02 µg/cm 3 n.oktaanissa valmistetaan laimentamalla 4.2.4 mukaisesti valmistettua bentso(a)pyreenin alkuperäistä standardiliuosta peräkkäin mittapulloissa, joissa on hiottu tulppa ja joiden tilavuus on 100 cm 3. Liuokset säilytetään jääkaapissa. Liuosten säilyvyysaika on enintään yksi kuukausi.

    4.2.6 1,12-bentsperyleenistandardiliuoksen (sisäinen standardi) valmistaminen

    Alkuliuoksen valmistamiseksi punnitaan (10,0 + 0,2) mg 1,12-bentsperyleeniä pulloon, lisätään muutama millilitra n.oktaania, kunnes näyte on täysin liuennut. Saatu liuos siirrettiin kvantitatiivisesti hiotulla tulpalla varustettuun mittapulloon, jonka tilavuus oli 100 cm3, ja lisättiin merkkiin n.oktaanilla. Saadun liuoksen 1,12-bentsperyleenin massapitoisuus on 100 µg/cm3. Liuos säilytetään jääkaapissa. Liuoksen säilyvyysaika on enintään kolme kuukautta.

    4.2.7 1,12-bentsperyleenin työliuosten valmistus (sisäiset standardiliuokset)

    Työliuokset, joiden 1,12-bentsperyleenin massapitoisuus on 0,01; 0,005; 0,002 ja 0,001 μg / cm3

    valmistettu n.oktaanissa laimentamalla peräkkäin 4.2.6 mukaisesti valmistettua alkuperäistä standardiliuosta mittapulloissa, joissa on hiottu tulppa ja joiden tilavuus on 100 cm 3. Liuokset säilytetään jääkaapissa. Liuosten säilyvyysaika on enintään yksi kuukausi.

    4.3 Testin suorittaminen

    4.3.1 Bentso(a)pyreenin erottaminen tuotteesta

    Pyöreäpohjaiseen pulloon, jonka tilavuus on 500 cm 3, laitetaan 25 g painava näyte tuotteesta, lisätään pulloon 20 cm 3 tislattua vettä, 200 cm 3 etyylialkoholia ja 20 g kaliumhydroksidia.

    Pullon sisältö sekoitetaan ravistamalla. Kolvi yhdistetään palautusjäähdyttimeen ja kuumennetaan vesihauteessa reaktioseoksen kiehuessa 3 h. Sitten pulloon lisätään 150 cm3 vettä jäähdyttimen kautta; pullo poistetaan hauteesta ja jäähdytetään huoneenlämpötilaan.

    Jäähdytyksen jälkeen reaktioseoksen nestefaasi siirretään dekantoimalla erotussuppiloon, jolloin loput tuotteesta jää pulloon. Kolviin lisätään 150 cm3 n-heksaania jäännöksen kanssa, pullon sisältöä sekoitetaan voimakkaasti ja n-heksaani dekantoidaan erotussuppiloon.

    Suppilo suljetaan ja ravistetaan voimakkaasti, kiinnitetään sitten telineeseen ja jätetään erottelemaan nesteitä. Saadun emulsion erottamiseksi seokseen lisätään erotussuppilossa 20 cm3 etyylialkoholia. Erottamisen jälkeen alempi vesi-alkoholifaasi kaadetaan takaisin pulloon sakan kanssa ja heksaaniuute kaadetaan 500 cm3:n pulloon.

    Tämä reaktioseoksen käsittely suoritetaan vielä kaksi kertaa käyttämällä uuttamiseen 100 cm3 n-heksaania ja emulsion erottamiseen etyylialkoholia 20 cm3:n erissä.

    Uuton päätyttyä pullossa oleva jäännös ja hydrolysaatti heitetään pois, uute pestään erotussuppilossa tislatulla vedellä kolme kertaa 50 cm 3:n tilavuudella ja haihdutetaan annoksittain pyöreäpohjaisessa pullossa, jonka tilavuus on 250 cm 3 esipunnittuna toisen desimaalin tarkkuudella pyöröhaihduttimella vesihauteen lämpötilassa enintään 60 °С. Uutepullo jätetään vetokaapiin liuottimen jäämien poistamiseksi, minkä jälkeen se punnitaan uudelleen. Uutetun uutteen paino määräytyy punnituksen välisen eron perusteella.

    Pullossa olevasta uutteesta otetaan 1/5 osa pulloon ilman punnitsemista. Pullo, jossa on jäljellä oleva uutte, punnitaan. Lisää 0,1-0,2 cm 3 bents(a)pyreenin "todistaja"-liuosta, joka on valmistettu kohdan 4.2.3 mukaisesti, pulloon, jossa on osa uutteesta. Pullon sisältö ja jäännös pullossa liuotetaan pieneen määrään petrolieetteriä.

    Uutteen kromatografista erotusta varten alumiinioksidia kaadetaan tasaisesti lasilevylle, jonka mitat ovat 20x40 cm. Sen jälkeen alumiinioksidi tasoitetaan huolellisesti käyttämällä lasitankoa, joka on jaettu kolmeen osaan (14, 1 ja 3 cm), joissa on 1 mm paksut ja 3 mm leveät kumirenkaat.

    Tuloksena saadut liuokset levitetään kvantitatiivisesti valmistetulle levylle lasikapillaareilla: kapeassa osassa - liuos pullosta ("todistaja"), leveässä osassa - tuotteen uute pullosta. Liuokset levitetään tasaisesti yhtenäisenä nauhana, astuen taaksepäin levyn alareunasta 7-8 cm.

    Levy asetetaan kromatografiahauteeseen lievässä 20° - 25° kulmassa, kaadetaan petrolieetteriä niin, ettei se saavuta näytteen levityslinjaa. Kylpy peitetään lasilla ja suoritetaan kromatografia, jolloin liuotinrintama tuodaan levyn yläreunaan.

    Kuivaamatta levyä, se säteilytetään ultraviolettivalolla ja bentso(a)pyreenin sijainti testinäytteessä määritetään valaisevan "todistaja"-kaistan avulla. Merkitse bentso(a)pyreeninauhan rajat testinäytteen kromatogrammiin. Levy kuivataan ilmassa vetokaapissa.

    Koenäytteen kromatogrammiin merkitty alumiinioksidiliuska poistetaan levyltä käyttämällä objektilasia ja siirretään kvantitatiivisesti suodatinsuppilon huokoiselle levylle. Suppilo liitetään pyöreäpohjaiseen 100 cm 3 -kolviin ja bentso(a)pyreeni eluoidaan alumiinioksidista 50 cm 3:llä bentseeniä, lisäämällä bentseeniä pienissä erissä ja sekoittaen suppilon päällä olevaa alumiinioksidia tikulla. Bentseeni haihdutetaan kuivaksi pyöröhaihduttimessa vesihauteen lämpötilassa, joka ei ylitä 60 °C. Kolvissa oleva jäännös siirrettiin kvantitatiivisesti oktaanin kanssa koeputkeen. Liuoksen tilavuus koeputkessa ei saa ylittää 5 cm 3 .

    Joidenkin tuotteiden analyysissä näytteen fluoresoivat komponentit eivät erotu täydellisesti ja selkeästi tuotteesta erotetun uutteen primaarisen kromatografian aikana. Tässä tapauksessa leveämpi alumiinioksidikaistale on eristetty levylle "todistaja" tasolla; bents(a)pyreeni eluoidaan alumiinioksidista bentseenillä edellä kuvatulla tavalla, ja haihdutusjäännös liuotetaan etanoliin ja saatu alkoholiuute kromatografoidaan uudelleen.

    Alkoholiuutteen kromatografiseen erottamiseen käytetään levyä, jonka mitat ovat 15 x 30 cm ja jossa on 0,3 mm paksu alumiinioksidikerros. Levylle erotetaan kaksi 10 ja 3 cm leveää nauhaa. Analysoidun tuotteen alkoholiuute levitetään levyn leveälle osalle lasikapillaarin avulla ja bentso(a)pyreeniliuos petrolieetterissä ("todistaja") Levy asetetaan hauteeseen 20 - 25° kulmassa ja suoritetaan kromatografia kloroformissa, jolloin liuotinrintama viedään levyn yläreunaan. Ultraviolettivalossa "todistaja" havaitsee alumiinioksidinauhan, jossa on tutkittavan tuotteen bentso(a)-pyreeniä. Sitten bentso(a)pyreeni eluoidaan alumiinioksidista bentseenillä ja kaikki muut toimenpiteet suoritetaan edellä kuvatulla tavalla.

    GOST R 51650-2000

    Bentso(a)pyreenin liuos n.oktaanissa siirretään koeputkeen. Liuoksen tilavuus ei saa ylittää 5 cm 3 , kun tuotteen alkuperäinen näyte on 25 g.

    Saadun liuoksen (uutteen) bents(a)pyreenipitoisuus määritetään matalan lämpötilan spektrofluorometriamenetelmällä käyttäen lisäysmenetelmää tai sisäistä standardimenetelmää kvantitatiiviseen arviointiin.

    4.3.2 Bentso(a)pyreenipitoisuuden määritys 4.3.1 kohdan mukaisesti saadusta liuoksesta (uutteesta) lisäysmenetelmällä.

    Kaada kolmeen koeputkeen pipetillä 1 cm 3 saatua bentso(a)pyreeniliuosta n.oktaanissa. Sitten ensimmäiseen koeputkeen kaadetaan 2 cm3 n.oktaania. Toiseen koeputkeen kaadetaan 1,5 cm3 n.oktaania ja 0,5 cm3 bents(a)pyreenin työliuosta, jonka massapitoisuus on 0,1 µg/cm3, valmistettuna kohdan 4.2.5 mukaisesti. Kolmanteen koeputkeen lisätään 1 cm 3 n.oktaania ja 1 cm 3 samaa bentso(a)pyreenin työliuosta kuin toiseen koeputkeen.

    Spektrofluorimetrinen analyysi alkaa kolmannesta koeputkesta. Tätä varten kolmas koeputki asetetaan Dewar-astiaan, jossa on nestemäistä typpeä spektrofotometrin sisääntuloraon eteen; aseta bentso(a)pyreenin analyyttinen fluoresenssiviiva 403 nm jännittävän valon aallonpituudelle 367 nm. Säätämällä vahvistusta ja avaamalla rako sekä säätämällä samanaikaisesti Dewar-astiassa olevaa koeputkea spektrofotometrin tallennuslaite saavuttaa maksimisignaalin (50 - 80 %), jonka jälkeen bentsospektrogrammi ( a) pyreeni tallennetaan alueella 401 - 404 nm, jolloin tallennuslaitteen spektrofotometrin arvo kiinnittyy aallonpituudelle 401 nm. Spektrin tallennus toistetaan kahdesti.

    Sitten toinen ja ensimmäinen putki jäädytetään peräkkäin nestetypessä ja fluoresenssispektrit tallennetaan aallonpituusalueella 401 - 404 nm. Muista asettaa tallenninkynä aallonpituudelle 401 nm samaan asentoon kuin skannattaessa näytettä kolmas putki.

    Analysoidun uutteen bentso(a)pyreenin massapitoisuus määritetään käyrän mukaan, jolle piirretään abskissa-akselia pitkin bentso(a)pyreenin lisäyksen arvo (µg) ja maksimin huipun korkeus. Bentso(a)pyreenin ominaisviiva aallonpituudella 403 nm piirretään ordinaatta-akselia pitkin mitattuna saaduista spektrogrammeista millimetreinä.

    Jos bentso(a)pyreenin massapitoisuus testiliuoksessa osuu mittauksille sopivalle alueelle, niin saadut koepisteet ovat samalla suoralla. Tämän suoran ekstrapolointi abskissa-akselin leikkauskohtaan antaa sille segmentin, joka vastaa bentso(a)-pyreenipitoisuutta liuoksessa ilman lisäainetta, eli 1 cm3:ssa testiliuosta. Jos bentso(a)pyreenin massapitoisuus analysoitavassa liuoksessa on suurempi kuin laitteen mittaaman pitoisuusalueen yläraja, analysoitava liuos laimennetaan n.oktaanilla.

    4.3.3 Bentso(a)pyreenipitoisuuden määritys liuoksesta (uutteesta), joka on saatu 4.3.1 kohdan mukaisesti sisäisen standardin menetelmällä

    1,12-bentsperyleeniä käytetään sisäisenä standardina. Kaada koeputkeen 3 cm 3 4.3.1 mukaisesti saatua bents(a)pyreenin n.-oktaaniliuosta ja laita se nestetyppeä sisältävään Dewar-astiaan spektrofotometrin sisääntuloraon eteen, aseta analyyttinen viiva 403 nm:iin jännittävän valon aallonpituudella 367 nm ja suorita liuoksen spektrin tallennus aallonpituusalueella 401-409 nm. Viivan intensiteetistä (bentso(a)pyreenin ominaisviivan maksimin huipun korkeuden mukaan 403 nm:ssä) arvioidaan likimääräinen bentso(a)pyreenin pitoisuus näytteessä. Tämän arvioinnin mukaisesti koeputkeen lisätään 1,12-bentsperyleeniliuosta, jossa on 3 cm 3 bents(a)pyreeniliuosta n.oktaanissa sellaisessa määrässä, että intensiteetti 1,12- bentsperyleeni näytteen spektrissä klo

    406,3 nm oli 3–5 kertaa suurempi kuin bents(a)pyreeniviivan intensiteetti aallonpituudella 403 nm.

    Spektri tallennetaan kahdesti aallonpituusalueella 401 - 409 nm.

    Bents(a)pyreenin tunnusviivojen intensiteetit aallonpituudella 403 nm ja 1,12-bentsperyleenin

    406,3 nm (H| ja H2, vastaavasti) määritetään spektrogrammeista mittaamalla piikkien korkeudet näiden yhdisteiden tunnusomaisten viivojen maksimipisteissä millimetreinä. Ota laskelmissa keskiarvo. Bents(a)-pyreeniviivan (EGD) intensiteetin suhdekerroin (K) 1,12-bentsperyleeni (EG 2) -viivan intensiteettiin lasketaan, K = //]/// 2.

    Seuraavaksi tämä kerroin määritetään bentso(a)pyreenin standardiliuoksille (X st). Tätä varten kaadetaan kahteen koeputkeen 3 cm 3 bents(a)-pyreenin standardiliuoksia, joiden massapitoisuus on 0,02 ja 0,04 μg/cm 3. Kuhunkin koeputkeen kaadetaan sama määrä 1,12-bentsperyleeniä kuin koeputkessa näytteen kanssa. Kunkin liuoksen spektrit tallennetaan kahdesti aallonpituusalueella 401 - 409 nm.

    Samalla on varmistettava, että tallentimen kynän sijainti aallonpituudella 401 nm on kaikissa tapauksissa kiinteä samalle tasolle.

    Seuraavaksi spektrogrammeista määritetään bents(a)pyreenin tunnusviivojen intensiteetti aallonpituudella 403 nm ja 1,12-bentsperyleenin aallonpituudella 406,3 nm (vastaavasti W ja H2). Ota laskelmissa keskiarvo. Laske K st \u003d H ^ H 2 kullekin bentso (a) pyreenipitoisuudelle.

    Bentso(a)pyreenin massapitoisuus analysoitavassa liuoksessa c, µg/cm 3 , lasketaan kaavalla:

    s st *K/K st, (1)

    missä c st on bentso(a)pyreenin pitoisuus standardiliuoksessa, µg/cm 3 ;

    K on kerroin, joka on löydetty analysoidun liuoksen spektrogrammista, jossa on lisätty 1,12-bentsperyleeniä;

    K C1 - 1,12-bentsperyleenilisäyksen sisältävän bents(a)pyreenin standardiliuoksen spektrogrammeista saatu kerroin, jonka arvo on arvoltaan lähempänä analysoidun liuoksen kerrointa vastaavalla lisäyksellä 1, 12-bentsperyleeni.

    Suoritetaan kaksi rinnakkaista määritystä ja samanaikaisesti kontrollikoe, joka suoritetaan läpi kaikki analyysin vaiheet käyttäen kaikkia menettelyn mukaisia ​​reagensseja, mutta ilman tuotenäytettä.

    4.4 Tulosten käsittely

    Bentsi (a) pyreenin massaosuus L),%, X ja X 2, mg / kg, lasketaan kaavoilla:

    = (s - er) ■m l V ■ 100 = (s - er) ■ t 1 ■ V (2)

    3 t 2 ■ t ■ 1000 ■ 1 000 t 2 ■ t

    _ (s - s 0) ■ V ■ t 1 (3)

    jossa c on kohdan 4.3.2 tai 4.3.3 mukaisesti määritetty bentso(a)pyreenin pitoisuus 4.3.1 mukaisesti saadun analysoidun tuotteen liuoksessa (uutteessa), µg/cm 3 ; c 0 on bentso(a)pyreenin pitoisuus kontrollikokeen liuoksessa, joka on saatu kohdan 4.3.1 mukaisesti, µg/cm 3 ; V on analysoidusta tuotenäytteestä eristetyn bentso(a)pyreeniliuoksen tilavuus, cm 3;

    /«I - analysoidusta tuotteesta eristetyn uutteen paino, g; m 2 - levyn leveälle nauhalle levitetyn uutteen massa, g; t on tuotenäytteen massa, g.

    Tulos pyöristetään toiseen merkitsevään numeroon.

    Määrityksen lopulliseksi tulokseksi otetaan aritmeettinen keskiarvo kahdesta rinnakkaisesta määrityksestä, joissa on sama määrä merkitseviä numeroita.

    Jos rinnakkaismääritysten tulosten välinen ero ei ylitä |A) - X 2 \<

    < 0,01яЖ, где Xi, Х 2 и X- результаты первого и второго параллельных определений и их среднеарифметическое, a d- норматив контроля сходимости, то среднеарифметическое X принимают за результат анализа. В противном случае анализ повторяют. Значение норматива контроля сходимости d приведено в таблице 1.

    Analyysin X tuloksen ja taulukossa 1 esitetyn suhteellisen virheen d arvon perusteella lasketaan absoluuttinen virhe A = 0, (SD mg/kg tai %).

    Analyysin tulos esitetään muodossa (X ± A), mg/kg tai %, kun P = 0,95.

    4.5 Analyysitulosten tarkkuuden valvonta

    Analyysin tulosten laadun sisäinen operatiivinen valvonta (IQA) sisältää analyysin tulosten konvergenssin, toistettavuuden ja tarkkuuden valvonnan.

    4.5.1 Toistettujen määritysten toistettavuus tarkastetaan jokaisen 4.4 kohdan mukaisesti analysoidun näytteen osalta.

    4.5.2 Toistettavuuden sisäiseen valvontaan käytetään työnäytteitä. Näyte jaetaan kahteen yhtä suureen osaan ja analysoidaan metodologian mukaisesti eri laboratorioissa tai samassa laboratoriossa vaihtelemalla analyysiolosuhteita mahdollisimman paljon, eli eri tilavuusvälinesarjoilla analyysit suoritetaan eri päivinä tai kahdella. eri analyytikot.

    Kontrollianalyysien toistettavuuden katsotaan olevan tyydyttävä, jos \X^ - X 2 \<

    < 0,01 DX, где X/, Х 2 и X- результаты анализа одной и той же пробы, полученные в разных лабораториях или при варьирующих условиях в одной лаборатории и их среднеарифметическое значение, D - значение норматива внутреннего оперативного контроля воспроизводимости. Значение норматива D приведено в таблице 1.

    GOST R 51650-2000

    Toistettavuustarkastuksen taajuus on vähintään kerran kahdessa viikossa.

    Taulukko 1 - Mittausalue, suhteellisen virheen ominaisuuden arvo ja suhteellisen virheen satunnaiskomponentin (konvergenssi ja toistettavuus) toiminnallisen ohjauksen standardit luottamustasolla Р = 0,95

    4.5.3 Tarkkuuden hallitsemiseksi käytä työnäytteitä, joihin on lisätty bentso(a)pyreeniä. Näyte jaetaan kahteen yhtä suureen osaan, joista toinen analysoidaan menettelyn mukaisesti; toisessa lisätään tunnettu lisäys bentso(a)pyreeniä ja analysoidaan sitten myös menettelyn mukaisesti. Lisäaineen arvon tulee olla 50 - 150 % analysoitavan näytteen bentsapyreenipitoisuudesta.

    Kontrollianalyysien tarkkuutta pidetään tyydyttävänä, jos \Xy-X-c\< 0,01 К, где Ху, Xи с - результаты контрольных анализов пробы с добавкой бенз(а)пирена, реальной пробы и величина добавки бенз(а)пирена, соответственно; К- норматив оперативного контроля точности. Норматив оперативного контроля точности рассчитывают по формулам: при проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0,90)

    K \u003d 0,84 V (A X]) 2 + (A x) 2; (4)

    ulkoisen ohjauksen aikana (P = 0,95)

    K \u003d V (A ^) 2 + (A z) 2, (5)

    jossa A^ + A x ovat massapitoisuutta vastaavan virheominaisuuksien arvot

    bentso(a)pyreeni näytteessä lisäaineen kanssa ja todellisessa näytteessä;

    Ay, \u003d 0,01 Xy ja A x \u003d 0,01d x X, missä Xy ja X ovat bentso (a) pyreenin massaosuus näytteessä lisättynä

    ja todellisessa näytteessä % tai mg/kg.

    Suhteellisen virheen d x (8y) arvo on annettu taulukossa 1.

    Analyysin tarkkuuden valvonta suoritetaan vähintään kerran kuukaudessa, samoin kuin reagensseja vaihdettaessa tai pitkän työtauon jälkeen.

    Jos tarkkuuden toiminnan valvonnan standardit ylittyvät, suoritetaan toistuvia analyyseja. Jos määritellyt standardit ylittyvät toistuvasti, analyysit keskeytetään, epätyydyttävään tulokseen johtaneet syyt selvitetään ja ne eliminoidaan.

    WQA:n tulokset kirjataan erityiseen päiväkirjaan.

    5 Korkean suorituskyvyn nestekromatografia- ja spektrofluorimetritekniikat huoneenlämpötilassa

    Menetelmän ydin on hiilivetyjen, mukaan lukien bentso(a)pyreeni, uuttaminen heksaanilla tuotteesta, joka on aiemmin käsitelty kaustisen potaskan alkoholiliuoksella, polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen, joka sisältää bentso(a)pyreeniä, eristämisessä, ja tuloksena olevan fraktion puhdistaminen häiritsevistä epäpuhtauksista Sephadex-pylväässä ja ohuella kerroksella asetyloitua selluloosaa, mitä seuraa eristetyn bentso(a)pyreenin kvantitatiivinen määritys korkean erotuskyvyn nestekromatografialla tai spektrofluorimetrialla huoneenlämpötilassa.

    Bents(a)pyreenin massaosuuden määritetyt arvot analysoituissa tuotteissa käyttämällä korkean erotuskyvyn nestekromatografiamenetelmää ja spektrofluorimetriaa huoneenlämpötilassa on 0,0001-0,002 mg / kg tai 0,1 x 10 -7 - 2,0 x 10 -7 % . Optimaalinen määritetyn bentso(a)pyreenin massapitoisuuksien vaihteluväli liuoksessa korkean erotuskyvyn nestekromatografiamenetelmää käytettäessä on 0,01-0,02 μg/cm 3, spektrofluorimetrimenetelmää käytettäessä - 0,02-0,2 μg/cm 3 .

    Bentsopyreeni kuuluu polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen luokkaan - PAH:t. Tämä on ryhmä orgaanisia yhdisteitä, joiden kemiallisessa rakenteessa on bentseenirenkaita - kolmen tai useamman renkaan ryhmiä. Bentsapyreenin kemiallinen määritelmä: hiiltä sisältävä orgaaninen aine, joka kuuluu polysyklisten hiilivetyjen ryhmään ja jonka moolimassa on 252,31 g / mol.

    Mikä on bentsapyreeni

    Bentsopyreeni, kuten kaikki PAH-yhdisteet, on pääasiassa teknologisen kehityksen tulosta, seurausta ihmisen toiminnasta. PAH-yhdisteiden teknogeenisen saastumisen pääasialliset lähteet ovat kiinteiden ja nestemäisten orgaanisten aineiden polttaminen, mukaan lukien öljy ja öljytuotteet, puu ja ihmisperäiset jätteet. Bentsapyreenin luonnollisista lähteistä kannattaa huomioida metsäpalot, tulivuorenpurkaukset.

    Bentsapyreenin muodostuminen voi kuitenkin tapahtua myös ilman palamisprosesseja - pyrolyysin, kytemisen, polymeroinnin aikana.

    Bentsapyreeniä vapautuu tupakoinnin aikana: bentsapyreenipitoisuus yhden savukkeen savussa on keskimäärin 0,025 mcg, mikä on monta kertaa suurempi kuin MPC (keskimäärin 10 000-15 000 kertaa). On laskettu, että yhden savukkeen polttaminen vastaa 16 tunnin pakokaasun hengittämistä bentsapyreenipitoisuudellaan.

    Bentsopyreenin kaava

    Bentsapyreenillä on kaksi isomeeriä. Ensimmäinen on 1,2-bentsapyreeni (3,4-bentspyreeni) - joka sisältyy kaikkiin palamistuotteisiin - öljyyn, tervaan, kivihiileen, eri alkuperää olevaan savuun, mukaan lukien. Puhtaassa muodossaan nämä ovat neulan muotoisia kiteitä tai vaaleankeltaisia ​​levyjä, joiden sulamispiste on noin 177 ° C.

    4,5-bentsopyreeni - kiteet neulojen ja vaaleankeltaisten levyjen muodossa, sulamispiste 179 ° C. Sisältää kivihiilitervaa, löytyy maaperästä (erityisesti yritysten ja valtateiden lähellä). Sillä ei ole mutageenisia tai syöpää aiheuttavia ominaisuuksia.

    Bentsopyreenien kemiallinen kaava on C20H12.

    Bentsopyreeni maaperässä ja ilmassa

    Bentsopyreeniä ei käytännössä esiinny vapaassa tilassa, vaan se saostuu aina ilman sisältämiin hiukkasiin. Yhdessä liikkuvien ilmamassojen kanssa bentsapyreeni leviää laajalle alueelle ja putoaa ilmasta yhdessä kiinteiden hiukkasten kanssa (esimerkiksi sateen aikana) maaperän kerroksiin, säiliöihin ja rakennusten pinnoille.

    Bentsapyreenin kulkeutumisessa ja kertymisessä myös sellaisella lähteellä kuin tieliikenne on osansa. Toisaalta, kun autot liikkuvat pitkiä matkoja, ne edistävät bentsapyreenin tasaista jakautumista. Toisaalta laskeutunut bentsapyreeni kerääntyy suuria määriä valtateiden varrelle ja niiden viereisille esineille (ns. "toissijaiset lähteet").

    Bentsopyreeni on helposti "sisällytetty" luonnon ainekiertoon: saostumalla, joka sisältää aina kiinteitä hiukkasia, se kulkeutuu jopa PAH-yhdisteiden päälähteestä kaukana oleville alueille, joutuu vesistöihin, josta se nousee haihtumisprosessien aikana taas ilmaan. Juuri tämä kyky siirtyä bentsapyreeni johtaa siihen, että sen pitoisuus voi olla korkea paikoissa, joissa tämän aineen voimakasta lähdettä ei ole.

    Ympäristöön joutuessaan ja siihen kerääntyessään bentsapyreeni tunkeutuu kasveihin, jotka myöhemmin toimivat karjan rehuna tai käytetään ihmisten ravinnoksi. Bentsapyreenin pitoisuus kasveissa on korkeampi kuin sen pitoisuus maaperässä ja elintarvikkeissa (tai rehussa) korkeampi kuin niiden valmistukseen käytettävässä raaka-aineessa. Tätä kemikaalien, mukaan lukien bentsapyreenin, pitoisuutta lisäävää vaikutusta kutsutaan bioakkumulaatioksi.

    Näin ollen bentsapyreeni on vaarallinen paitsi ympäristön taustasaasteena, myös ravintoketjun kautta elimistöön tunkeutuvana aineena.

    Bentsapyreenin MAC

    Pääasiallinen menetelmä bentsapyreenin määrittämiseksi ja säätämiseksi on nestekromatografia.

    Hygieniastandardien 2.1.6.695-98 ja 2.1.6.1338-03 mukaan bentsapyreenin suurin sallittu keskimääräinen päivittäinen määrä ilmassa (MACd) on 0,1 µg/100 m3 tai 10-9 g/m3 ja sen MAC maaperässä. Hygieniastandardien 2.1 mukaan 7.2041-06 - 0,02 mg / kg yhteensä taustataso huomioon ottaen. Työpaikkojen ilmassa keskimääräinen työvuoron MPC on enintään 0,00015 mg/m3. (lausekkeesta 1. ja lausekkeesta 2. GN 2.2.5. 1313-03).

    Bentsapyreenin MPC vedessä on enintään 0,000001 mg/l, juomavedessä, jossa on keskitetty vesihuolto - enintään 0,000005 mg/l. Pullotetussa juomavedessä - korkeintaan 0,001 µg/l (korkeinlaatuinen vesi) enintään 0,005 µg/l ensimmäisen laatuluokan pullotetussa vedessä.

    Elintarvikkeissa, joissa bentsapyreenin esiintyminen on teknisten ominaisuuksien vuoksi sallittua, bentsapyreenin sallittu taso on enintään 0,001 mg / kg. Näitä ovat: makkarat ja tuotteet, joissa käytetään sivutuotteita, mukaan lukien savustetut; savustettu laardi; makkarat ja savustetut tuotteet siipikarjanlihasta ja muista eläimenosista; savustetut säilykkeet ja kalasäilykkeet, savustettu kala; ruokaviljaa.

    Savuaromeja käytettäessä bentsapyreenipitoisuus on enintään 2 µg/kg (l) ja niiden käytön jälkeen bentsapyreenipitoisuus lopputuotteissa saa olla enintään 0,03 µg/kg (l).

    Muissa elintarvikkeissa bentsapyreeniä ei sallita.

    Tarkkailutulosten mukaan bentsapyreenipitoisuuden normit kuitenkin ylittyvät moninkertaisesti. Keskimäärin ilmansaasteiden taso kaupungeissa on 5-12 kertaa korkeampi kuin MPC, maaperässä - 3-7 kertaa, elintarvikkeissa - 1,5 - 11 kertaa.

    Bentsapyreenin vaikutus ihmiskehoon

    Bentsopyreeni on luokiteltu ensimmäisen vaaraluokan aineeksi. Ensimmäinen vaaraluokka ovat aineet, joilla on erittäin suuri haitallinen ympäristövaikutus, mutta niiden aiheuttamat muutokset ovat peruuttamattomia eikä niitä voida palauttaa.

    Bentsopyreeni on yksi voimakkaimmista mutta laajalle levinneistä syöpää aiheuttavista aineista. Koska se on kemiallisesti ja termisesti stabiili, sillä on bioakkumulaatioominaisuudet, se toimii jatkuvasti ja voimakkaasti, kun se tulee kehoon ja kerääntyy siihen. Sen lisäksi, että bentsapyreeni on syöpää aiheuttava, sillä on mutageeninen, alkiotoksinen ja hematotoksinen vaikutus.

    Bentsapyreenin tunkeutumisreitit kehoon ovat erilaisia: ruoan ja veden kanssa, ihon läpi ja hengitettynä. Vaaran aste on riippumatta siitä, kuinka bentsapyreeni on päässyt kehoon. Kokeissa sekä ekologisesti epäsuotuisten alueiden seurannan mukaan bentsapyreeniä viedään DNA-kompleksiin aiheuttaen peruuttamattomia mutaatioita, jotka siirtyvät seuraaville sukupolville. Erityisen huolestuttavaa on bentsapyreenin bioakkumulaatio: mutaatioiden kehittymisen todennäköisyys seuraavien sukupolvien jälkeläisille kasvaa moninkertaiseksi biokertymisen vuoksi.

    HALUATKO LOPETA TUPAKOINTI?


    Liity sitten kanssamme maratonille tupakoinnin lopettamiseksi.
    Se tekee lopettamisesta paljon helpompaa.

    Lue myös...

    Mitä keittää hauesta. Hauen vaaralliset ominaisuudet

    Mitä keittää hauesta. Hauen vaaralliset ominaisuudet

    Korva päässä ja hännän vaaleanpunainen lohi

    Korva päässä ja hännän vaaleanpunainen lohi

    Perunakakut pannussa: valokuvaresepti

    Perunakakut pannussa: valokuvaresepti

    Esittelyssä sivustolla
    1

    Pizzan kalorit täytteestä riippuen
    2

    Sherry vermutti. Kaikki sherrystä
    3

    Inkiväärilimonadin valmistus kotona
    4

    Inkiväärilimonadi: paras vitamiinijuoma
    5

    Kermajäätelöä ilman kananmunia
    Uusi
    Valmiiden ruokien pakastaminen: illallisen valmistaminen nopeasti ja helposti

    Valmiiden ruokien pakastaminen: illallisen valmistaminen nopeasti ja helposti
    Armenian vodka: tyypit ja arvostelut

    Armenian vodka: tyypit ja arvostelut
    Raputikut Vici: koostumus, kalorit, valmistaja Raputangot

    Raputikut Vici: koostumus, kalorit, valmistaja Raputangot "Bay of Plenty"
    Raputangot vichi koostumus

    Raputangot vichi koostumus
    Morosha – Ukrainalainen kivennäisvesivodkan ekomerkki Väärennössuoja

    Morosha – Ukrainalainen kivennäisvesivodkan ekomerkki Väärennössuoja
    Jäätelö

    Jäätelö "Twister" - ilo lapsille ja aikuisille
    Erinomainen tuote Riisiruskea mistral

    Erinomainen tuote Riisiruskea mistral
    Ainutlaatuinen vodkanvihreä etiketti Halpa vihreä etiketti

    Ainutlaatuinen vodkanvihreä etiketti Halpa vihreä etiketti

    Suosittelemme lukemista